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標(biāo)簽：脈沖場凝膠脈沖場凝膠電泳是在兩個不同方向的電場周期性交替進行的，可分離長至5Mb的DNA分子，其工作原理是DNA分子在交替變換方向的電場中作出反應(yīng)所需的時間取決于它的大小。較小的分子重新定向較快，因而在凝膠中移動也較快，于是不同大小的分子被成功分離。實驗方法倒轉(zhuǎn)電場實驗材料DNA試劑、試劑盒GTBETBE瓊脂糖儀器、耗材電泳儀實驗步驟1.制備用于水平電泳的1%瓊脂糖凝膠，放入電泳裝置，其上覆蓋以2~3mm的GTBE或TBE緩沖液。2.加入液體樣品。裝好蠕動泵用于電泳緩沖液循環(huán)。3.對于微型
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DNA實驗技術(shù)：細(xì)菌中制備基因組DNA實驗
標(biāo)簽：細(xì)菌基因DNA真核生物的一切有核細(xì)胞（包括培養(yǎng)細(xì)胞）都能用來制備基因組DNA。真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細(xì)胞核內(nèi)，因此，制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質(zhì)、脂類和糖類等分離，又要保持DNA分子的完整。實驗方法小量制備氯化銫法實驗方法原理提取DNA的一般過程是將分散好的組織細(xì)胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質(zhì)，再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質(zhì)，得到的DNA溶液經(jīng)乙醇沉淀使DNA從溶液中析出。實驗材料細(xì)菌試劑、試劑盒TE氯化銫溴化乙錠NaCl乙醇C -
標(biāo)簽：植物組織基因DNA利用基因組DNA較長的特性，可以將其與細(xì)胞器或質(zhì)粒等小分子DNA分離。在提取過程中，染色體會發(fā)生機械斷裂，產(chǎn)生大小不同的片段，因此分離基因組DNA時應(yīng)盡量在溫和的條件下操作，如盡量減少酚/氯仿抽提、混勻過程要輕緩，以保證得到較長的DNA。實驗方法氯化銫法CTAB法實驗方法原理加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中，可用玻棒將其取出，而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部，從而達到提取的目的。實驗材料植物組織試劑、試劑盒抽提緩沖液
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標(biāo)簽：哺乳動物基因DNA在DNA提取過程中應(yīng)盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續(xù)的實驗打下基礎(chǔ)。一般真核細(xì)胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織、培養(yǎng)細(xì)胞或低溫保存的組織細(xì)胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細(xì)胞，隨后用酚抽提而實現(xiàn)的。實驗方法制備DNA實驗材料動物組織試劑、試劑盒PBS乙酸銨乙醇酚氯仿異戊醇TE儀器、耗材離心機搖床研缽實驗步驟1.切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結(jié)。2.將200mg~1g的組織用預(yù)冷的研缽和研
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DNA實驗技術(shù)：大腸桿菌質(zhì)粒DNA 的提?。▔A裂解法）
此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切PCR擴增。1.取1.5ml細(xì)菌培養(yǎng)物于EP管中，4000rpm離心1分鐘，棄上清液，使細(xì)菌沉淀盡量干燥；2.將細(xì)菌沉淀重懸于用冰預(yù)冷的100μl溶液I（50mmol/L葡萄糖，10mmol/LEDTApH8.0，25mmol/LTris-HClpH8.0）中，劇烈振蕩；3.加入200μl新配制的溶液II（0.2mol/LNaOH，1％SDS（m/v）），蓋緊EP管口，快速顛倒離心管5次，以混合混合物，確保離心管的整個內(nèi)表面與溶液II -
一、簡介：SSR簡單序列重復(fù)標(biāo)記（Simplesequencerepeat,簡稱SSR標(biāo)記），也叫微衛(wèi)星序列重復(fù)，是由一類由幾個核苷酸（1-5個）為重復(fù)單位組成的長達幾十個核苷酸的重復(fù)序列，長度較短，廣泛分布在染色體上。由于重復(fù)單位的次數(shù)的不同或重復(fù)程度的不*相同，造成了SSR長度的高度變異性，由此而產(chǎn)生SSR標(biāo)記或SSLP標(biāo)記。雖然SSR在基因組上的位置不盡相同，但是其兩端序列多是保守的單拷貝序列，因此可以用微衛(wèi)星區(qū)域特定順序設(shè)計成對引物，通過PCR技術(shù)，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳，即可顯示SSR位
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1.紫外燈下仔細(xì)切下含待回收DNA的膠條，將切下的膠條（小于0.6g）搗碎，置于1.5ml離心管中；2.加入等體積的Tris-HCl飽和酚（pH7.6），振蕩混勻；3.-20℃放置5-10min；4.4℃離心10000g×5min，上層液轉(zhuǎn)移置另一離心管中；5.加入1/4體積H2O于含膠的離心管中，振蕩混勻；6.-20℃，放置5-10min；7.4℃離心10000g×5min，合并上清液；8.用等體積酚/氯仿、氯仿分別抽提一次，取上清；9.加入1/10體積3MNaAc（pH5.2）、2.5倍體積
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物種的遺傳多樣性在本質(zhì)上是DNA一級序列的多樣性。近年來，隨著DNA測序技術(shù)的迅速發(fā)展和日益普及，DNA測序在遺傳多樣性的研究中正在起著越來越大的作用。本章將介紹目前在遺傳多樣性研究中常用的一種手動和一種全自動雙鏈DNA測序方法。1DNA模板的制備在遺傳多樣性的研究中，由于樣本量一般都較龐大，因而DNA測序的速度就成了很關(guān)鍵的因素。因此，這類研究中常常直接測定純化的PCR雙鏈產(chǎn)物而不大采用克隆技術(shù)。本節(jié)介紹本實驗室常用的從PCR產(chǎn)物制備測序模板的方法，即低熔點膠回收法。（1）制備1.5％～2.0
