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10 2015年 09月: 多克隆抗體的制備步驟

實(shí)驗(yàn)試劑生理鹽水（或PBS）弗氏*佐劑（Freund’scompleteadjuvant，F(xiàn)CA）弗氏不*佐劑（Freund’sincompleteadjuvant，F(xiàn)IA）二甲苯，酒精棉，脫脂棉，2%NaN3實(shí)驗(yàn)設(shè)備剪刀（剪兔毛用）一把、彎頭眼科手術(shù)鑷子（游離血管用）一把、直頭眼科手術(shù)剪（剪血管用）一把，手術(shù)刀架，手術(shù)刀片，注射器（1ml、10ml，25ml）附針頭，兔子固定架，滅菌三角燒瓶（200ml）或平皿（直徑18cm）、彎頭止血鉗四把，直頭止血鉗兩把，手術(shù)縫合線，塑料放血管，紗布等。實(shí)
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10 2015年 09月: 核酸探針標(biāo)記

實(shí)驗(yàn)原理分子生物研究中，zui常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因植物拷貝數(shù)的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機(jī)引物合成法。切口平移法(nicktranslation)當(dāng)雙鏈DNA分子的一條鏈上產(chǎn)生切口時(shí),E.coliDNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時(shí)該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時(shí)又在切口的3'端補(bǔ)上核苷酸,從而使切口沿著DNA鏈移動(dòng),用放射性核苷酸代替原先無(wú)放
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10 2015年 09月: 線粒體的活體染色的及電鏡照片觀察

實(shí)驗(yàn)原理線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器，是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場(chǎng)所。細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)所需要的能量，主要是通過(guò)線粒體呼吸作用來(lái)提供的?；铙w染色是應(yīng)用無(wú)毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動(dòng)的一種染色方法。詹納斯綠B是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無(wú)色狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)試劑1.l／300詹納斯綠B染液2.Ringer氏液(哺乳類用)實(shí)驗(yàn)設(shè)備1.顯微鏡2.手術(shù)器材一套3.解剖盤4.小平皿5.載片6.蓋片7
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12 2013年 10月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：分子克隆的常用載體

DNA段的克隆需要合適的載體，載體或是質(zhì)粒，或是噬菌體，或是病毒，通常大多經(jīng)過(guò)人工改造[地的。作為載體必須具備兩條件：一是該載體在細(xì)胞內(nèi)必須能自主復(fù)制，即必須具備復(fù)制原點(diǎn)；二是該載體必須具備適合的酶切位點(diǎn)，且這些酶切位點(diǎn)不在復(fù)制原點(diǎn)區(qū)域內(nèi)。以上兩條，保證了載體的可繁殖性和可利用性。為了便于獲得陽(yáng)隆克隆，載體上常有篩選標(biāo)記，如對(duì)抗菌素的抗性，某些基因產(chǎn)物的顯色反應(yīng)等。一、質(zhì)粒常用的有pBR322，pUC系列質(zhì)粒等。（一）pBR322質(zhì)粒是4362bp的環(huán)狀雙鏈DNA載體，有2個(gè)抗藥性基因（四環(huán)素和
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12 2013年 10月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：基因組DNA甲基化分析方法

早期的基因組DNA甲基化分析技術(shù)，如SssI甲基轉(zhuǎn)移酶分析法、氯乙醛反應(yīng)法、免疫學(xué)抗體技術(shù)等，已經(jīng)不能滿足現(xiàn)代表觀遺傳學(xué)研究的需求。今年來(lái)常用的基因組甲基化的方法有以下兩種。1.甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性實(shí)驗(yàn)甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性實(shí)驗(yàn)技術(shù)被用于檢測(cè)雙向型真菌的DNA甲基化，它是在擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)、基本程序是：提取高質(zhì)量的基因組DNA，分別用EcoRⅠ/HpaⅡ，EcoRⅠ/MspⅠ兩種酶組合對(duì)基因組DNA進(jìn)行雙酶切，并連上相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶的接頭，然后以接頭序列設(shè)計(jì)的預(yù)擴(kuò)增引物，進(jìn)
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12 2013年 10月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：基因突變的一般特性

基因突變是遺傳物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的改變，包括在DNA分子編碼區(qū)的密碼子和密碼閱讀框的改變?；蛲蛔兛梢园l(fā)生在體細(xì)胞，也可以發(fā)生在生殖細(xì)胞中，這兩種突變有*不同的后果。發(fā)生于生殖細(xì)胞中的基因突變可以遺傳給后代。發(fā)生于機(jī)體其他組織細(xì)胞中基因突變的體細(xì)胞突變，可以引起發(fā)生突變個(gè)體的形態(tài)或生理上的變異，只能通過(guò)無(wú)性生殖的形式傳遞給后代，而不能通過(guò)有性生殖遺傳下去（在胚胎細(xì)胞發(fā)育時(shí)期出現(xiàn)的情況例外）。1．突變的稀有性基因突變的稀有性是指在正常情況下，突變率（mutationrate）往往是很低的。所謂突變率是指
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12 2013年 10月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：高質(zhì)量DNA獲取方法之月桂酸鈉法

從組織中獲取DNA難嗎？不難，真不難。高一就有開設(shè)的從雞血中獲取DNA的生物實(shí)驗(yàn)課，很簡(jiǎn)單的幾步就可以得到DNA。但要想獲取高質(zhì)量的DNA，尤其是從一些富含多糖、多酚、淀粉、纖維和蛋白的組織，后面用于酶切、高通量測(cè)序大片段文庫(kù)的構(gòu)建,還是有一定的難度的。zui近協(xié)助北京農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心一個(gè)老師提取桃葉片DNA還是遇到了一些困難，因?yàn)槔蠋熞鎏业膫€(gè)體重測(cè)序，因此對(duì)DNA的要求還是非常高的。之前跟其他很多老師交流植物DNA的提取，大多數(shù)目前仍然使用CTAB法，有些老師購(gòu)買試劑盒進(jìn)行提取，其實(shí)很多
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12 2013年 10月: DNA測(cè)序：測(cè)序常見問(wèn)題及其分析

1、PCR產(chǎn)物測(cè)序時(shí)出現(xiàn)重疊峰問(wèn)題圖1（模板中有堿基缺失，往往是單一位點(diǎn)（1-1）或兩個(gè)位點(diǎn)（1-2）堿基缺失導(dǎo)致測(cè)序結(jié)果移碼）圖1-1圖1-2解決方法：將PCR產(chǎn)物克隆到質(zhì)粒（如T載體）中挑單克隆測(cè)序，或?qū)CR產(chǎn)物進(jìn)行PAGE純化（至少瓊脂糖充分電泳后切膠純化）后再進(jìn)行測(cè)序。問(wèn)題圖2（PCR產(chǎn)物不純，含部分序列一致的兩種以上的片段，長(zhǎng)度不一）圖2解決方法：主要原因是PCR產(chǎn)物沒(méi)有純化，含有部分序列一致的兩種以上長(zhǎng)度不一的片段，將PCR產(chǎn)物進(jìn)行PAGE純化（至少瓊脂糖充分電泳后切膠純化）后再進(jìn)
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