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（二）、除雜及抗體哺育。8、超聲破碎結(jié)束后，10，000g4oC離心10min。去除不溶物質(zhì)。留取300ul做實驗，其余保存于-80oC。300ul中，100ul加抗體做為實驗組；100ul不加抗體做為對照組；100ul加入4ul5MNaCl（NaCl終濃度為0.2M），65oC處理3h解交聯(lián)，跑電泳，檢測超聲破碎的效果。9、在100ul的超聲破碎產(chǎn)物中，加入900ulChIPDilutionBuffer和20ul的50×PIC。再各加入60ulProteinAAgarose/SalmonSpe
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熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）（圖）
實驗原理熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門新興的分子細胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術(shù)。目前這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體精細結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進化研究待許多領(lǐng)域。FISH的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行異性結(jié)合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DN -
1.探針的標(biāo)記：（1）如下設(shè)置探針標(biāo)記的反應(yīng)體系：待標(biāo)記探針（1.75pmol/微升）2微升T4PolynucleotideKinaseBuffer（10X）1微升Nuclease-FreeWater5微升[γ-32P]ATP（3,000Ci/mmolat10mCi/ml）1微升T4PolynucleotideKinase（5-10U/微升）1微升總體積10微升按照上述反應(yīng)體系依次加入各種試劑，加入同位素后，Vortex混勻，再加入T4PolynucleotideKinase，混勻。（2）使用水
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一、原理質(zhì)粒DNA粘附在細菌細胞表面，經(jīng)過42°C短時間的熱擊處理，促進吸收DNA.然后在非選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)一代，待質(zhì)粒上所帶的抗菌素基因表達，就可以在含抗菌素的培養(yǎng)基中生長。二、器材旋渦混合器，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5ml微量離心管，雙面微量離心管架，干式恒溫氣?。ɑ蚝銣厮″仯?，制冰機，恒溫搖床，培養(yǎng)皿（已鋪好固體LB-Amp），超凈工作臺，酒精燈，玻璃涂棒，恒溫培養(yǎng)箱。三、試劑培養(yǎng)基（不加抗菌素），LB培養(yǎng)基（加抗菌素），無菌ddH2O,IPTG,X-gal.四、實驗準(zhǔn)備無菌dd
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一、實驗?zāi)康呐c原理質(zhì)粒多為一些雙鏈、環(huán)狀的DNA分子，是獨立于細菌染色體之外進行復(fù)制和遺傳的輔助性遺傳單位。質(zhì)粒是進行分子生物學(xué)實驗操作，進行遺傳工程改良物種等工作時zui主要的DNA載體。提取質(zhì)粒的基本步驟分為三步：①細菌的培養(yǎng)和質(zhì)粒的擴增②細菌菌體的裂解③質(zhì)粒DNA的純化本實驗采取的菌體裂解方法為堿解法，質(zhì)粒純化方法為梯度離心法。二、材料與試劑1、材料：大腸桿菌2、儀器：超凈工作臺，培養(yǎng)箱，搖床，恒溫水浴鍋，臺式離心機，取液器一套，低溫冰箱，冷凍真空干燥機，電泳儀，水平電泳槽，紫外觀測儀3、
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1主題內(nèi)容與適用范圍本文規(guī)定了食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法。本文適用于航空食品的檢驗。2設(shè)備和材料吸管（1ml、10ml）、恒溫培養(yǎng)箱（36±1℃、44.5±0.5℃）、冰箱、均質(zhì)器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡等3培養(yǎng)基和試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白月示（LST）肉湯、煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯、EC肉湯、伊紅美藍瓊脂（EMB）、營養(yǎng)瓊脂斜面、色氨酸肉湯、MR-PV培養(yǎng)基、Korser氏枸掾酸鹽肉湯、結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）、Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液、
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嚴(yán)格的消毒滅菌對細胞與胚胎工程研究與應(yīng)用工作極為重要，直接影響著整個實驗?zāi)芊耥樌M行。（一）消毒滅菌方法目前常用的消毒滅菌方法多采用物理方法（如干熱滅菌法、濕熱滅菌法、過濾除菌法、射線殺菌法等）和化學(xué)方法（消毒劑、抗生素）兩大類。1．干熱滅菌法是利用恒溫干燥箱內(nèi)120oC～150oC的高熱，并保持90～120分鐘，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的的一種方法。主要適用于不便在壓力蒸汽滅菌器中進行滅菌，且不易被高溫損壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的滅菌。用此方法滅菌的物品干燥，易于貯存。
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實驗試劑BacteriumpreparationCryoprotectiveagentTrueCoolTMcryovial實驗設(shè)備CoolBoxTMCFT30ice-freecoolingstationCoolRack®CFT30CoolRack®CFCryolabelsand/orcryomarkersThermalTrayHPplatform（optional）CoolSinkTMBX50（optional）37°Cwaterbath-80°CFreezer實驗步驟1.BacteriaPre
