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02
2013年
08月 -
標簽：區(qū)域特異性誘變可在長達3‘的克隆化DN段上產(chǎn)生大量的隨機分布的核苷酸替換突變，在將DNA克隆到一個可用來分離單鏈DNA的載體后，用各種可造成特定堿基損傷的化學試劑處理。實驗方法基本方案實驗材料DNA試劑、試劑盒乙酸鈉亞硝酸鈉TE無水乙醇dNTP反轉(zhuǎn)錄酶RNA酶洗脫液溴化乙錠儀器、耗材水浴鍋培養(yǎng)箱實驗步驟1.用限制性內(nèi)切核酸酶消化DNA以獲得目的DN段，將靶片段雙向克隆到M13噬菌體載體或含有M13復制起始子的質(zhì)粒載體中。從100ml感染細抱培養(yǎng)物中提取單鏈DNA。2.在三個微量離心管內(nèi)各加【查看全文】
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02
2013年
08月 -
一、原理SNP（SingleNucleotidePolymorphism）即單核苷酸多態(tài)性，是由于單個核苷酸改變而導致的核酸序列多態(tài)性（Polymorphism）。據(jù)估計，在人類基因組中，大約每千個堿基中有一個SNP，無論是比較于限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分析還是微衛(wèi)星標記（STR），都要廣泛得多。SNP是我們考察遺傳變異的zui小單位,據(jù)估計，人類的所有群體中大約存在一千萬個SNP位點。一般認為，相鄰的SNPs傾向于一起遺傳給后代。于是，我們把位于染色體上某一區(qū)域的一組相關(guān)聯(lián)的SNP等位【查看全文】
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02
2013年
08月 -
一、材料、試劑和儀器1、材料：植物總RNA5-10μg2、試劑：1）加樣運載緩沖液（Loadingbuffer）50%甘油1mmol/LEDTA（pH8.0）0.25%溴酚藍25%二甲苯氰FF2）10×TAEBuffer3）5×甲醛凝膠電泳緩沖液：0.1mol/LMOPs（pH7.0）40mmol/L乙酸鈉5mmol/LDETA（pH8.0）4）甲醛，甲酰胺3、儀器：電泳裝置，紫外透射觀測儀二、實驗程序1、甲醛變性的瓊脂糖（Agarose）凝膠的配制在250mL的錐形瓶中準確稱量2gAgaros【查看全文】
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27
2013年
07月 -
多藥抗藥基因的表達實驗標簽：抗藥基因多藥抗藥基因的表達實驗是通過反轉(zhuǎn)錄和PCR的方法來檢測特定基因的過度表達。實驗方法PCR擴增法實驗方法原理大多MDR細胞膜上出現(xiàn)MDR-1基因及其基因產(chǎn)物P-糖蛋白過度表達。實驗材料RNA試劑、試劑盒PBS氯仿異丙醇萘酸異硫氰酸肽十二烷基肌酸鈉構(gòu)櫞酸鈉乙酸鈉二疏基乙醇乙醇Taq酶儀器、耗材離心機紫外分光光度計瓊脂糖凝膠電泳PCR儀實驗步驟一、細胞總RNA提取1.收集約5×107個細胞，冷PBS洗滌。2.加入400ulRNA提取液（含6mol/l的異硫氰酸肽，0【查看全文】
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27
2013年
07月 -
一、堿變性法提取質(zhì)粒DNA質(zhì)粒（Plasmid）是細菌染色體外能自身獨立復制的雙股環(huán)狀DNA。帶有遺傳信息，可賦予細菌某些新的表型。將質(zhì)粒指紋圖譜分析方法、質(zhì)粒DNA探針技術(shù)及檢測質(zhì)粒的PCR技術(shù)用于臨床感染性疾病的診斷和流行病學調(diào)查已成為現(xiàn)實。質(zhì)粒作為載體在基因工程中起著重要的作用。分離和純化質(zhì)粒DNA的方法很多，但這些方法基本包括三個步驟：即細菌的培養(yǎng)和質(zhì)粒DNA的擴增，細菌菌體的裂解；質(zhì)粒DNA的提取與純化。本實驗學習用堿變性方法提取質(zhì)粒DNA。原理細菌培養(yǎng)物加入SDS和NaOH堿性溶液處【查看全文】
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27
2013年
07月 -
一.實驗目的及背景高等動物，高等植物的基因組相當龐大，如人類細胞基因組由30億個堿基對組成，果蠅基因組有1.4×108個堿基對，水稻基因組有1.4×109個堿基對。真核細胞基因組中，約1萬－1.5萬個可表達的結(jié)構(gòu)基因，其它大量存在的是調(diào)控序列和內(nèi)含子序列。可以說某特定物種的基因組，包含了該物種生長，發(fā)育，繁殖等各項生理活動的幾乎全部信息量，因而對真核細胞基因組的結(jié)構(gòu)，組成，以及表達調(diào)控的研究是至關(guān)重要的，而研究的起點就是要獲得純度高--不含蛋白質(zhì)、糖類、酚、氯仿等污染；得率好--以便有足夠量用于【查看全文】
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22
2013年
07月 -
本文先講zui簡單的一個點的定點突變技術(shù)，其它較長片段的突變，刪除，插入技術(shù)以后會慢慢奉上：在做實驗之前，我們首先要搞清楚實驗的目的和實驗的原理。實驗的目的應(yīng)該比較明確吧：就是要把自己的基因上面的一個堿基換成另外一個堿基。一般情況下我們會有幾種可能使我們需要這樣去做：*我們吊出來的基因有點突變，相信這可能是大家經(jīng)常會遇到的問題?；蚝貌蝗菀椎醭鰜?，并裝進了自己的載體，卻發(fā)現(xiàn)有一兩個堿基跟自己的預期序列或所有的公共數(shù)據(jù)庫不匹配，然后暴昏。大家實驗室里面還是用Taq酶為主吧，Pfu這樣的高保真酶大家【查看全文】
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22
2013年
07月 -
血基因組DNA提取可以：（1）從凍全血、血漿、血清、骨髓、其他體液、淋巴細胞、培養(yǎng)細胞、病毒和線粒體中提取DNA；（2）用于后續(xù)測序、遺傳信息學等研究。實驗方法血基因組DNA試劑盒提取法血基因組DNA大量試劑盒提取法血基因組DNA中量試劑盒提取法實驗方法原理本試劑盒采用特殊的細胞裂解和蛋白去除液（包括蛋白酶K裂解）從抗凝全血中得到基因組DNA。適用于從凍全血、血漿、血清、骨髓、其他體液、淋巴細胞、培養(yǎng)細胞、病毒和線粒體中提取DNA。實驗材料抗凝全血試劑、試劑盒血基因組DNA試劑盒儀器、耗材96孔【查看全文】
