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細(xì)胞技術(shù)專題：大鼠乳鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：大鼠乳鼠成骨細(xì)胞大鼠乳鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)可以：（1）獲得大鼠乳鼠成骨細(xì)胞；（2）用于骨修復(fù)的細(xì)胞學(xué)機(jī)制研究。實(shí)驗(yàn)方法酶消化法實(shí)驗(yàn)方法原理取材于出生2~3d小鼠顱骨，以含20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，采用膠原酶消化法分離成骨細(xì)胞，并進(jìn)行細(xì)胞接種與傳代。采用膠原酶消化法分離培養(yǎng)成骨細(xì)胞是一種可靠、簡便、快速的細(xì)胞原代分離培養(yǎng)方法。實(shí)驗(yàn)材料SD大鼠試劑、試劑盒F12*培養(yǎng)液胰蛋白酶Ⅱ型膠原酶酒精儀器、耗材手術(shù)器械磁力攪拌器實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)步驟1.拉頸處死24小時(shí)內(nèi)新生的SD大鼠，75% -
細(xì)胞技術(shù)專題：光學(xué)顯微鏡檢測腫瘤細(xì)胞形態(tài)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：光學(xué)顯微鏡檢測腫瘤細(xì)胞形態(tài)光學(xué)顯微鏡檢測腫瘤細(xì)胞形態(tài)可以：（1）輔助判斷腫瘤細(xì)胞是否凋亡；（2）用于病理檢查；（3）提取腫瘤細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)信息。詳細(xì)實(shí)驗(yàn)方法瑞氏-吉姆薩混染法HE染色法實(shí)驗(yàn)方法原理吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。1）嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)果，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；2）細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)；3）中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)。PH對 -
細(xì)胞技術(shù)專題：小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)小鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)可以：（1）用于細(xì)胞保種；（2）用于分子生物學(xué)研究；（3）用于基因治療研究。實(shí)驗(yàn)方法胰酶消化法實(shí)驗(yàn)方法原理將小鼠的肝細(xì)胞從機(jī)體中取出，經(jīng)胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖。實(shí)驗(yàn)材料小鼠試劑、試劑盒DMEM無血清DMEM培養(yǎng)基胰酶PBS儀器、耗材飯盒紗布剪子鑷子燒杯平皿研磨玻片濾網(wǎng)離心管6孔培養(yǎng)板吸管移液管手套微量加樣器實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.動(dòng)物：小鼠。2.試劑：DMEM(含血清)、無血清 -
細(xì)胞技術(shù)專題：腫瘤細(xì)胞侵襲試驗(yàn)（Tumour Invasion Assay）
一、原理Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養(yǎng)基中重建形成膜結(jié)構(gòu)，這種膜結(jié)構(gòu)與天然基質(zhì)膜結(jié)構(gòu)極為相似。濾膜孔徑一般為8um，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細(xì)胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運(yùn)動(dòng)才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜，這與體內(nèi)情況較為相似。鋪有Martrigel的濾膜放在以BlindWell腔或MICS腔上下室之間，鋪有Martrigel面朝向上室，在下 -
細(xì)胞技術(shù)專題：細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
材料：6孔板marker筆直尺20微升槍頭（滅菌）無血清培養(yǎng)基PBS準(zhǔn)備：所有能滅菌的器械都要滅菌，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min（超凈臺(tái)內(nèi)）流程：1、先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻地劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。2、在空中加入約5X105個(gè)細(xì)胞，具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同，掌握為夜能鋪滿。3、第二天用槍頭比著直尺，盡量垂直于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不要傾斜。4、用PBS洗細(xì)胞3次，去除劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基。5、放入 -
細(xì)胞技術(shù)專題：平板細(xì)胞克隆形成試驗(yàn)
概念：細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率，表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量。貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞。克隆形成率反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。基本步驟：1、取對數(shù)生長期的各組細(xì)胞，分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個(gè)細(xì)胞，并把細(xì)胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中備用。2、將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋，每組細(xì)胞分別以每皿50、100、200個(gè)細(xì)胞的梯度密度分別接種含10mL37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使細(xì) -
細(xì)胞技術(shù)專題：細(xì)胞周期測定實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：細(xì)胞周期體外培養(yǎng)周期測定細(xì)胞周期測定可以：（1）作為生物相容性評價(jià)指標(biāo)；（2）用于研究細(xì)胞凋亡；（3）作為選擇細(xì)胞的依據(jù)。詳細(xì)實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞計(jì)數(shù)法BrdU滲入法流式細(xì)胞儀測定法實(shí)驗(yàn)方法原理體外培養(yǎng)細(xì)胞生長、分裂繁殖的能力，可用分裂指數(shù)來表示。它與生長曲線有一定的，如隨著分裂指數(shù)的不斷提高，細(xì)胞也就進(jìn)入了指數(shù)生長期。分裂指數(shù)指細(xì)胞群體中分裂細(xì)胞所占的百分比，它是測定細(xì)胞周期的一個(gè)重要指標(biāo)，也是不同實(shí)驗(yàn)研究選擇細(xì)胞的重要依據(jù)。實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞試劑、試劑盒胰酶甲醇培養(yǎng)液冰醋酸Giemsa染液儀器、耗材 -
細(xì)胞技術(shù)專題：大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)可以：（1）用于血液流動(dòng)性、防止血栓形成、調(diào)節(jié)血管張力等研究；（2）用于選擇性通透性以及免疫調(diào)節(jié)等方面研究。實(shí)驗(yàn)方法貼塊法實(shí)驗(yàn)方法原理貼塊法適用于內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)量低的、管徑較小血管的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)，其方法較酶消化法簡便、經(jīng)濟(jì)。但缺點(diǎn)使易混有成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，前者的貼壁時(shí)間和內(nèi)皮接近，后者貼壁較內(nèi)皮慢，而且會(huì)被肝素所抑制。實(shí)驗(yàn)材料雄性Wistar大鼠試劑、試劑盒DMEM胎牛血清內(nèi)皮細(xì)胞生長因子肝素鈉青鏈霉素明膠胰蛋白酶PBSD-Hanks’液儀器
