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細(xì)胞技術(shù)專題:小鼠腹腔巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽:小鼠腹腔巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)可以:(1)用于細(xì)胞保種;(2)用于分子生物學(xué)研究;(3)用于基因治療研究。實(shí)驗(yàn)方法腹腔取材法實(shí)驗(yàn)方法原理巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞,有多種功能,是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象。巨噬細(xì)胞容易獲得,便于培養(yǎng),并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì)胞群,在條件適宜下可生活2-3周,多用做原代培養(yǎng),難以長期生存。巨噬細(xì)胞也建有無限細(xì)胞系,大多來自小鼠,如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等,均獲惡性,培養(yǎng)中呈巨噬細(xì)胞形態(tài)和吞噬功能,易 -
正常培養(yǎng)的細(xì)胞自噬活性很低,不適于觀察,因此,必須對自噬進(jìn)行人工干預(yù)和調(diào)節(jié),經(jīng)報(bào)道的工具藥有:一、自噬誘導(dǎo)劑(1)BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin:模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(2)Carbamazepine/L-690,330/LithiumChloride(氯化鋰):IMPase抑制劑(即Inositolmonophosphatase,肌醇單磷酸酶)(3)Earle's平衡鹽溶液:制造饑餓(4)N-Acetyl-D-sphingosine(C2-ceramide):C
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細(xì)胞技術(shù)專題:細(xì)胞計(jì)數(shù)及活力測定實(shí)驗(yàn)
一、原理培養(yǎng)的細(xì)胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好,所以要進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)結(jié)果以每毫升細(xì)胞數(shù)表示。細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理和方法與血細(xì)胞計(jì)數(shù)相同。在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞,總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力,由組織中分離細(xì)胞一般也要檢查活力,以了解分離的過程對細(xì)胞是否有損傷作用。復(fù)蘇后的細(xì)胞也要檢查活力,了解凍存和復(fù)蘇的效果。用臺盼蘭染細(xì)胞,死細(xì)胞著色,活細(xì)胞不著色,從而可以區(qū)分死細(xì)胞與活細(xì)胞。利用細(xì)胞內(nèi)某些酶與特定的試劑發(fā)生顯色反應(yīng),也可測定細(xì)胞相對數(shù)和相對活力。二、儀器 -
細(xì)胞技術(shù)專題:新生大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽:新生大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)可以:(1)細(xì)胞保種;(2)用于細(xì)胞形態(tài)研究;(3)應(yīng)用于臨床研究。實(shí)驗(yàn)方法胰酶消化法實(shí)驗(yàn)方法原理將大鼠的心肌細(xì)胞從機(jī)體中取出,經(jīng)胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細(xì)胞,置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖。實(shí)驗(yàn)材料SD乳鼠試劑、試劑盒低糖DMEM、胰酶EDTA青鏈霉素碳酸氫鈉液新生牛血清谷氨酰胺D-Hank's液新潔爾滅碘酒酒精儀器、耗材鋁盒眼科直剪眼科彎剪眼科直鑷眼科彎剪玻璃培養(yǎng)皿廣口瓶棉球燒杯錐形瓶離心管磁力攪拌器攪 -
細(xì)胞技術(shù)專題:PI3K/Akt/mTOR信號通路
目的:通過特異性阻斷PI3K和mTOR,觀察HepG2和Hep3B細(xì)胞株P(guān)I3K/Akt/mTOR信號通路活性及生物學(xué)行為的改變,探討相關(guān)的分子機(jī)制。方法:在培養(yǎng)的HepG2、Hep3B人肝癌細(xì)胞株和人正常肝細(xì)胞株QSG-7701上,以免疫印跡方法(Westernblot)檢測各細(xì)胞株中PI3K(p110α亞單位)、PTEN、pAkt(S473,T308)和p-mTOR(S2448)的表達(dá)情況;分別用PI3K抑制劑LY294002(50μmol/ml)和mTOR抑制劑Rapamycin(RAPA -
細(xì)胞技術(shù)專題:細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽:細(xì)胞原代培養(yǎng)細(xì)胞原代培養(yǎng)可以:(1)為研究生物體細(xì)胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段;(2)為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件;(3)服務(wù)于臨床實(shí)踐,用于藥物篩選等。實(shí)驗(yàn)方法胰酶消化法組織塊直接培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)方法原理將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出,經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理,分散成單細(xì)胞,置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖,這一過程稱原代培養(yǎng)。因此,較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),如果是正常細(xì)胞,仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際 -
細(xì)胞技術(shù)專題:小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽:小鼠胚胎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)原代培養(yǎng)可以:(1)用于細(xì)胞保種;(2)用于分子生物學(xué)研究;(3)用于基因治療相關(guān)研究。實(shí)驗(yàn)方法胰酶消化法1胰酶消化法2實(shí)驗(yàn)方法原理將小鼠的胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)從機(jī)體中取出,經(jīng)胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細(xì)胞,置MEF生長培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖。實(shí)驗(yàn)材料孕鼠試劑、試劑盒PBSEDTA胰酶MEF生長培養(yǎng)基FBS高糖DMEM儀器、耗材眼科直剪眼科直鑷眼科彎鑷玻璃平皿3尼龍濾網(wǎng)離心管手術(shù)刀片實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)材料 -
細(xì)胞技術(shù)專題:流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡:PI單染色法
一、基本原理其原理主要是根據(jù)細(xì)胞凋亡時(shí)在細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子水平上所發(fā)生的特征性改變。這些改變包括細(xì)胞核的改變、細(xì)胞器的改變、細(xì)胞膜成分的改變和細(xì)胞形態(tài)的改變等,其中細(xì)胞核的改變特征性,主要包括以下幾個(gè)方面:1、細(xì)胞核的改變由于凋亡細(xì)胞核的改變,造成各種染色體熒光染料對凋亡細(xì)胞DNA可染性發(fā)生改變。研究表明,用各種染色體熒光染料對經(jīng)固定的凋亡細(xì)胞進(jìn)行染色,其DNA可染性降低。許多學(xué)者把這種DNA可染性的降低認(rèn)為是凋亡細(xì)胞的標(biāo)志之一。2、光散射特性凋亡細(xì)胞形態(tài)上的改變影響它們的光散射特性。在流式細(xì)胞