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生物三凝膠基質(zhì)
細(xì)胞因子分子
生物樣本庫
消除細(xì)胞聚團(tuán)就是這么簡單！2021/9/22
當(dāng)在生長培養(yǎng)基中進(jìn)行單懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，樣本中出現(xiàn)細(xì)胞丟失的情況并不少見。當(dāng)細(xì)胞破裂時(shí)，它們會釋放DNA和碎片，導(dǎo)致細(xì)胞聚集成大團(tuán)塊，使其難以擴(kuò)張。細(xì)胞聚團(tuán)既可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，也可引起細(xì)胞死亡。隨著更多的...
清晰的條帶是這樣跑出來的——western blot八大秘訣！2021/9/17
1.制膠：先制分離膠，再制濃縮膠，嚴(yán)格按照制膠說明書來就可以了。需要注意的一點(diǎn)是制膠一定要混勻！混勻！混勻！個(gè)人經(jīng)驗(yàn)是每加一種試劑，就混勻一下，直到最后一種試劑加完。對于初學(xué)者，還要區(qū)分制膠的玻璃板是...
如何在WB中順利獲取大分子蛋白？2021/9/17
分子量大于150Ka的蛋白，經(jīng)常折磨我們實(shí)驗(yàn)人。想當(dāng)初，辛辛苦苦忙到深夜，結(jié)果發(fā)現(xiàn)顯影空空如也。連續(xù)幾個(gè)月如此，內(nèi)心是何等抓狂。當(dāng)大分子條帶第一次出來的時(shí)候，心里特別開心，就像見到了初戀情人一樣。看到...
如何優(yōu)雅地獲得漂亮小分子蛋白條帶2021/9/17
做過Western-Blot的童鞋知道，分子量小于30KDa的蛋白分子不容易做。小分子蛋白虐我千百遍，我待小分子蛋白如初戀。抱怨是沒用的，想方設(shè)法解決問題才是正道。一次又一次的調(diào)整方案，一次又一次的徒...
分享總結(jié)Western跑磷酸化蛋白的要點(diǎn)2021/9/17
抗體工欲善其事必先利其器，抗體很關(guān)鍵。這里我們要說的并不是最貴的就是好的，如果條件允許，建議同時(shí)購買不同廠家的抗體，一起來試一試，因?yàn)橛袝r(shí)候即使是好的品牌，不同批次穩(wěn)定性也不一樣?？贵w從訂購到到貨有一...
盤點(diǎn)RACE技術(shù)的幾種類型及特點(diǎn)2021/9/16
在分子生物學(xué)中，未知基因全長序列的獲取是研究新基因的重要步驟。當(dāng)我們不清楚目的基因的完整序列時(shí)，獲得未知序列的方法有反向PCR、mRNA差異顯示技術(shù)、基因組減法技術(shù)以及cDNA文庫篩選技術(shù)等等.......
搞定內(nèi)參，駕馭 Western blot 已成功一半2021/9/15
westernblot對絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)新人而言，絕對是心中痛，一碰就要抓狂。沒辦法,誰讓導(dǎo)師發(fā)話了，WB做不好，延畢就是分分鐘的事兒。這還真是讓小伙伴們感嘆道，WB想說愛你不容易。那么為了*馴服WB，獲...
用磷酸化抗體做Western Blot時(shí)，要注意哪些？2021/9/15
今天給大家分享一下在用磷酸化抗體做WesternBlot時(shí)，應(yīng)該注意些什么。1.警惕內(nèi)部敵人一定要在lysisbuffer中加入蛋白酶抑制劑，還要加入一定量的磷酸酶抑制劑，因?yàn)榻M織或細(xì)胞裂解時(shí)會釋放出...
Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析2021/9/15
Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析①微笑條帶解析：由于凝膠的中間部分凝固不均勻所致，多出現(xiàn)于較厚的凝膠處理辦法：配膠時(shí)一定要充分混勻，待其充分凝固后再做后續(xù)試驗(yàn)②帶出現(xiàn)紋理現(xiàn)象解析：樣品不溶性顆粒處理...
WB的免疫印跡操作分享2021/9/14
①膜處理（甲醇1min，風(fēng)干（放濾紙上），甲醇1min，水1min）②封閉（用TBST配5%牛奶）1h配搖床③加一抗，牛奶稀釋,所需濃度參考抗體說明書，看膜的大小配多少一抗，4°過夜。④室溫孵育20m...
WB過程中最重要的環(huán)節(jié)——轉(zhuǎn)膜2021/9/14
①跑到溴酚藍(lán)距離最下緣25px時(shí)配電轉(zhuǎn)液（tris3.03g，甘氨酸14.4g，甲醇100ml，定容至1L）②在電轉(zhuǎn)液中剝膠，裁膠，剪膜，膜活化（甲醇1min，去離子水1min，電解液15min）③“...
WB電泳技巧分享2021/9/14
①清洗玻璃板，去離子水沖，風(fēng)干或烤干（一定要以處女座的精神去嚴(yán)格要求自己把板子洗干凈，相當(dāng)重要）②按說明書配膠。先配下膠（分離膠），一般兩塊板配10ml的10%的膠（20~80kDa通用）膠的濃度根據(jù)...
蛋白樣品的制備與定量2021/9/14
（1）提細(xì)胞蛋白①消化或刮下細(xì)胞至1.5的EP管中，標(biāo)記，10000r離心2min，PBS洗3遍②吸去EP管中PBS，最好用濾紙吸干里面的水分，加適量RIPA裂解液（RIPA裂解液：蛋白酶抑制劑=25...
三天征服Chip的經(jīng)驗(yàn)分享2021/9/13
在科研界，CHIP無疑是高冷的女神，在追逐的過程總是分分鐘虐得體無完膚，糟心的實(shí)驗(yàn)結(jié)果更是分分鐘想去“狗帶”。征服CHIP的路上，有多虐心就有多少要注意的地方。慶幸的是，曾得到女神青睞的前輩們積累了不...
CO-IP沒有條帶的常見原因和解決的辦法2021/9/13
CO-IP并不容易做，尤其是兩個(gè)蛋白豐度低，相互作用力較弱的時(shí)候。做CO-IP經(jīng)常會遇到?jīng)]有條帶的問題。這里談?wù)凜O-IP沒有條帶的常見原因和解決的辦法，更有獨(dú)門配方獻(xiàn)上。蛋白濃度過稀絕大多數(shù)情況下，...
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