當在生長培養(yǎng)基中進行單懸浮細胞培養(yǎng)時，樣本中出現(xiàn)細胞丟失的情況并不少見。當細胞破裂時，它們會釋放DNA和碎片，導致細胞聚集成大團塊，使其難以擴張。細胞聚團既可導致細胞凋亡，也可引起細胞死亡。

隨著更多的細胞死亡并釋放碎片，問題將繼續(xù)惡化。盡可能快地處理或避免細胞聚團將有利于實驗的后續(xù)結(jié)果。

為什么細胞聚團是個問題？

單細胞懸浮培養(yǎng)基的目標是為靶細胞提供盡可能多的生長資源。這包括充足的生長營養(yǎng)和充足的繁殖空間。當細胞聚集在一起時，它們會相互限制，降低細胞對營養(yǎng)吞吐量，最終影響生長結(jié)果。

細胞聚團也會導致靶細胞的回收率降低，并且會干擾標記，這也是懸浮細胞標記的成功率不高的原因，某些細胞分析方法，如流式細胞術(shù)，需要對細胞進行適當?shù)姆蛛x。在流式細胞術(shù)中，大量細胞以快速的液流通過機器。這臺被稱為細胞儀的機器檢測不同細胞之間物理特性的差異，并使用熒光燈對它們進行相應(yīng)的標記。如果細胞通過試管時聚集在一起，細胞儀將很難準確測量它們的特性。這會導致它們被不正確地分類，并對實驗結(jié)果產(chǎn)生負面影響。

細胞聚團的原因

防止細胞聚團的最佳方法之一是了解是什么導致了細胞聚集，并采取預防措施避免這些事件的發(fā)生。培養(yǎng)物中細胞可能聚集的一些原因包括： 

1.過度消化-某些用于組織分解的酶，如胰蛋白酶，如果過量使用會導致細胞結(jié)塊

2.環(huán)境壓力-物理壓力和反復的溫度變化會導致細胞死亡，從而導致細胞的“粘性"的DNA分子將相鄰的細胞連接在一起

3.組織分解-在制備單細胞懸浮液時，使用酶、機械或化學分解策略可使細胞破裂，從而導致碎片的聚團。 

4.過度生長-當細胞在其培養(yǎng)基中密度過大的時候，細胞將開始溶解并釋放碎片，碎片中的粘性因子會將細胞聚集到一起

5.污染-某些細菌和真菌病原體導致細胞溶解；結(jié)塊通常是細胞培養(yǎng)物被污染的跡象

6.雖然其中一些是由于實驗錯誤而發(fā)生的，但實際也有部分的細胞具有天生的聚團現(xiàn)象，比如大部分的半懸浮細胞，BV-2 ,NCI-H716等等，半懸浮細胞一般在在整體匯合度70%左右就要進行傳代操作了，這樣可以降低細胞聚成大團塊的風險。

怎么減少細胞聚團？

1. 在開始實驗之前，可以采取一些措施來防止細胞聚集。例如，一種名為DNA酶I的內(nèi)切酶可以混合到培養(yǎng)基中，從破裂的細胞中分離DNA。分解這些多余的碎片有助于保持靶細胞生長的空間。然而，dna酶I使用過多會導致細胞突變，最終會影響您的實驗效果，所以實在不是逼不得已，不建議使用。

2. 通過適當?shù)奶幚砗驮O(shè)備使用，也可以減少結(jié)塊。如果使用離心機分離或混合樣品，將其設(shè)置為正確的速度可以減少聚團，通常情況下，較快的速度可以離心散細胞，但在高速下也必須考慮細胞的脆弱性，所以適當?shù)难娱L離心的時間也不失為一種穩(wěn)靠的離心散懸浮聚團細胞的方法

3.還有一些方法可以分離細胞，這些細胞聚集在一起，不會造成過度的傷害。某些叫做螯合劑的化學物質(zhì)與正電荷離子有親和力。根據(jù)細胞聚團的性質(zhì)，可以添加螯合劑來溶解它們之間的粘連，而不會傷害細胞。乙二胺四乙酸（EDTA）是一種螯合劑，常用于溶解鈣粘連。 

4.另一種細胞清除方法是氚化。氚化過程涉及到溫和、重復的吸管，以打破細胞間的弱粘連。