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小鼠巨噬細胞Ana-1使用說明書
小鼠巨噬細胞；Ana-1使用說明書
品名稱 ：小鼠巨噬細胞；Ana-1
生長特性 ： 貼壁生長
形態(tài)特性
生長特性 懸浮生長
特征特性
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清，10%
傳代方法 1:2。3天內可長滿。
傳代情況 PN
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體應用：
1、細胞因子檢查試劑盒，如白介素、腫瘤壞死因子、干擾素、轉化生長因子、凋亡因子等等； 2、心肌梗塞檢查ELISA試劑盒，如肌鈣蛋白、肌紅蛋白、C-反響蛋白等等；
3、內分泌檢查ELISA試劑盒，如甲狀腺、胰腺、性激素、孕酮、睪酮、生長激素、生長抑素、催乳素、促腎上腺皮質激素等等；
4、肝纖維化檢查ELISA試劑盒，如纖維連接蛋白、膠原、基質金屬蛋白酶，層粘蛋白等等；
5、本身免疫檢查，如甲狀腺、抗核抗體、DNA、抗胰島細胞抗體、蛋白酶、角蛋白抗體、
核糖體蛋白抗體、抗聚角蛋白微絲蛋白抗體、抗平滑肌抗體等等。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，吹打均勻后，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。
培養(yǎng)操作步驟
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。