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1、PS（磷脂酰絲氨酸）在胞外膜分布的檢測PS從胞膜內(nèi)側(cè)轉(zhuǎn)移到外側(cè)現(xiàn)象是在細(xì)胞凋亡的早期即可發(fā)生標(biāo)志。AnnexinV是一種鈣依賴性的磷脂結(jié)合蛋白，能專一性的結(jié)合暴露在胞膜外側(cè)的PS，使用熒光素標(biāo)記的AnnexinV蛋白（如AnnexinV-FITC）即可檢測細(xì)胞凋亡。由于這是一種凋亡早期的活細(xì)胞檢測（懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞都適用），可與DNA染料或別的晚期檢測方法相結(jié)合來標(biāo)記凋亡的發(fā)展階段。操作簡便快速，10分鐘就可完成檢測。靈敏度高，可作為流式方法分析凋亡細(xì)胞的基礎(chǔ)。2、細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)改變的
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微生物菌種冷凍干燥和液氮保藏菌種技術(shù)－、安瓶管開封1．用浸過70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。2．用火焰將安瓿管頂端加熱。3．滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。4．用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。二、菌株恢復(fù)培養(yǎng)1．用無菌吸管，吸取0.3～0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴人安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。2．取0.1～0.2ml菌體懸浮液，移植于適宜的瓊脂斜面／平板培養(yǎng)基上，剩余的菌液，注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi)，然后在建議的溫度下培養(yǎng)。3．若未能活化，或活化后有疑問時，請于收到菌種
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上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法上皮細(xì)胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮組織,故上皮細(xì)胞培養(yǎng)特別受到重視.但上皮細(xì)胞培養(yǎng)中?；祀s有成纖維細(xì)胞,培養(yǎng)時生長速度往往超過上皮細(xì)胞,并難以純化,同時上皮細(xì)胞難以在體外長期生存,因此純化和延長生存時間是培養(yǎng)關(guān)鍵.體內(nèi)上皮細(xì)胞生長在膠原構(gòu)成的基膜,因此培養(yǎng)在有膠原的底物上可能利于生長,另外人或小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng)在以3T3細(xì)胞為飼養(yǎng)層（用射線照射后）時,細(xì)胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現(xiàn)象.降低PH、Ca2+含量和溫度,向培養(yǎng)基中加入表皮生長
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細(xì)胞的純化的兩種方法細(xì)胞的純化一般分為兩種,即自然純化很人工純化.常用的純化方法有,酶消化法,細(xì)胞因子依賴純化法,機(jī)械刮除法,反復(fù)貼壁法,電烙篩選法.體外培養(yǎng)的細(xì)胞源于人或動物或胚胎組織,體內(nèi)的細(xì)胞都是混雜生長,每一種組織都有血管和間葉組織,因此,來源于上述組織的培養(yǎng)材料的原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞絕大多數(shù)都呈混合生長,既有上皮樣細(xì)胞又有纖維樣細(xì)胞,纖維樣細(xì)胞又包括成纖維細(xì)胞、肌細(xì)胞、骨細(xì)胞、滑膜細(xì)胞等,混雜的細(xì)胞會直接影響實驗結(jié)果,而利用體外培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行實驗研究時,為了保證實驗結(jié)果的可靠性、一致性、穩(wěn)
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T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗的基本原理T細(xì)胞在體外培養(yǎng)時,受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出現(xiàn)細(xì)胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫水平,因此可作為測定機(jī)體免疫功能的指標(biāo)之一.T細(xì)胞在體外培養(yǎng)時,受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出現(xiàn)細(xì)胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫水平,因此可作為測定機(jī)體免疫功能的指標(biāo)之一.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗
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細(xì)胞的復(fù)蘇及凍存方法一.細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)將液氮或-80℃保存的腫瘤細(xì)胞于37℃水浴，快速溶化，用8.0ml培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細(xì)胞懸液，于1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘。棄上清，再吸取8.0ml培養(yǎng)基質(zhì)混勻細(xì)胞沉淀，再1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘，棄上清，細(xì)胞沉淀用1.0ml培養(yǎng)基混勻，備用。另取一個75cm2方瓶，加入14.0ml培養(yǎng)基質(zhì)，將上述制備的含腫瘤細(xì)胞懸液(1.0ml)加入此方瓶中，于37℃，5%CO2孵育箱中培養(yǎng)。若此腫瘤細(xì)胞懸浮生長，大約3－4天細(xì)胞基質(zhì)會變黃，5.0ml細(xì)胞懸液可傳代
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影響細(xì)胞生長的幾點因素，摘要：細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng),失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制,因此,除滿足營養(yǎng)的要求外,還必須使細(xì)胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境.外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長.一、溫度：一般哺乳類及禽類細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃.溫度過高或過低都會影響到細(xì)胞的生長.細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng),在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時,雖影響細(xì)胞代謝,但并無傷害作用.把細(xì)胞置于23~25℃時,細(xì)胞仍能生存和生長,但速度減緩,不過,魚類細(xì)胞的適宜培養(yǎng)
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1冷凍管應(yīng)如何解凍?取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應(yīng)馬上去除DMSO?除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞)，在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題。3可否使用與
