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慢病毒轉(zhuǎn)染試劑

MCE 國際站：Lentivirus Transfection Reagent

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件：20°C，1 年避免反復(fù)凍融

簡介：MCE Lentivirus Transfection Reagent 是一種基于陽離子高分子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑，適用于慢病毒的包裝、轉(zhuǎn)染，能顯著提高包裝、轉(zhuǎn)染效率，并能產(chǎn)生更多的重組慢病毒。

概述：慢病毒載體是以 HIV-1 為基礎(chǔ)的基因治療載體，能使外源基因穩(wěn)定整合至宿主細(xì)胞基因組中，具有感染譜廣泛、有效感染分裂期和靜止期細(xì)胞、長期穩(wěn)定表達(dá)外源基因等優(yōu)點(diǎn)，因此成為導(dǎo)入外源基因的有力工具，廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞系的基因過表達(dá)、RNA 干擾、microRNA 研究及活體動物實(shí)驗(yàn)等。MCE Lentivirus Transfection Reagent 是一種基于陽離子高分子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑，適用于慢病毒的包裝、轉(zhuǎn)染，能顯著提高包裝、轉(zhuǎn)染效率，并能產(chǎn)生更多的重組慢病毒。經(jīng)轉(zhuǎn)染包裝獲得的對照質(zhì)粒病毒滴度可達(dá) 108 TU/mL，具有感染效率高、感染譜廣、重復(fù)性高及操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。

描述：

慢病毒載體是基于HIV-1的基因治療載體，可將外源基因穩(wěn)定整合到宿主細(xì)胞基因組中，具有感染譜廣、有效感染及分裂期長、細(xì)胞靜止、外源基因長期穩(wěn)定表達(dá)等優(yōu)點(diǎn)，已成為導(dǎo)入外源基因的有力工具，廣泛應(yīng)用于各類細(xì)胞系基因過表達(dá)、RNA干擾、microRNA研究及動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)等。

MCE慢病毒轉(zhuǎn)染試劑是一種基于陽離子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑，適用于慢病毒的包裝轉(zhuǎn)染，顯著提高包裝轉(zhuǎn)染效率，從而產(chǎn)生更多的重組慢病毒，轉(zhuǎn)染包裝得到的對照質(zhì)粒病毒滴度可達(dá)108 TU/mL，具有感染效率高、感染譜廣、重復(fù)性好、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。

操作說明：以 10 cm 細(xì)胞培養(yǎng)皿為例，其它培養(yǎng)體系加樣體積參照表 1。1.準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染細(xì)胞轉(zhuǎn)染前一天，將 4-6 × 106 個細(xì)胞 (293、293T等) 接種至 10 cm 細(xì)胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，使其在包裝時密度為 70%-80%。注：為提高病毒包裝效率，建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期、存活率 > 90% 的細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝。2.慢病毒包裝(1)取 4 μL 慢病毒包裝輔助質(zhì)粒混合物至 2 mL 離心管中，加入 4 μg 含有目的基因的慢病毒載體質(zhì)粒，輕柔混勻，加入 40 μL MCE Lentivirus Transfection Reagent 與質(zhì)?；旌?，室溫孵育 3 min。(2)加入 1.8 mL 無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基，輕柔混勻，室溫孵育 30 min，即形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。注：轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)核物在室溫下 4 h 內(nèi)保持穩(wěn)定。(3)將轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物 (1.8 mL) 逐滴均勻加入細(xì)胞中，輕柔混勻，置于 37°C 5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注：注意在滴加時緩慢，避免將細(xì)胞沖起，需輕柔混合均勻。3.收獲病毒(1)轉(zhuǎn)染 24 h 后，棄去初始病毒上清液，加入 10-15 mL 新鮮的培養(yǎng)基（含血清），置于 37°C 5% CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。(2)轉(zhuǎn)染 48 h 后，收集病毒上清液，再加入 10-15 mL 新鮮的培養(yǎng)基（含血清），置于 37°C 5% CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。(3)轉(zhuǎn)染 72 h 后，觀察細(xì)胞狀態(tài)并拍照，并收集病毒上清液，與 48 h 收集的上清液混合，800 × g 離心 10 min 以去除細(xì)胞碎片，使用 0.45 μm 濾器過濾，過濾后的上清液可直接感染目的細(xì)胞，或?qū)ζ錆饪s以獲得更高滴度的慢病毒濃縮液。注：凍融一次的病毒滴度將降低 10%-20%，慢病毒建議分裝后保存于 -80°C，并于半年內(nèi)使用，切忌反復(fù)凍融。注：細(xì)胞轉(zhuǎn)染時，可根據(jù)實(shí)際情況參考上表進(jìn)行等倍放大。4.慢病毒滴度檢測分析使用梯度稀釋法感染細(xì)胞，采用 PCR、qPCR 等方法測定病毒滴度

注意事項(xiàng)：1.轉(zhuǎn)染時，建議選用無內(nèi)毒素、純度高、無污染、無菌的優(yōu)質(zhì)質(zhì)粒。質(zhì)粒中的內(nèi)毒素會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率顯著下降，特別是內(nèi)毒素敏感的細(xì)胞（如原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、造血細(xì)胞等），推薦使用無內(nèi)毒素質(zhì)粒抽提試劑盒進(jìn)行質(zhì)粒提取，保證質(zhì)粒 A260/A280 比值在 1.8-2.0 之間，濃度不低于 500 ng/μL。2.需合理計(jì)算質(zhì)粒用量，轉(zhuǎn)染過量的質(zhì)粒可能會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。3.細(xì)胞狀態(tài)會影響轉(zhuǎn)染效率，從而影響慢病毒質(zhì)量，建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于 90% 的細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝。避免細(xì)胞培養(yǎng)基有細(xì)菌、真菌或支原體的污染，盡量使用傳代次數(shù)較少的細(xì)胞，如果細(xì)胞是剛復(fù)蘇的話，最好傳兩代之后再包裝。4.建議細(xì)胞傳代后 12-24 h 內(nèi)、細(xì)胞密度在 70%-80% 時進(jìn)行慢病毒包裝。在實(shí)驗(yàn)過程中保證相同的接種條件，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可重復(fù)性。5.MCE Lentivirus Transfection Reagent 可用于含有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染，并且轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)基。6.由于血清會影響-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物的形成，因此在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時需用無血清培養(yǎng)基稀釋 DNA 及轉(zhuǎn)染試劑。7.所有慢病毒操作均需在 BSL2 級生物安全柜中進(jìn)行，慢病毒轉(zhuǎn)染操作中涉及的槍頭、培養(yǎng)基等廢棄物，必須處理后才能丟棄。8.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

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