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PEI 轉(zhuǎn)染試劑

MCE 國(guó)際站：PEI Transfection Reagent

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件： -20°C，12個(gè)月避免反復(fù)凍融

簡(jiǎn)介：MCE PEI 轉(zhuǎn)染試劑是一款基于 25 kDa PEI 改造的 DNA 轉(zhuǎn)染試劑?？蓮V泛應(yīng)用于多種細(xì)胞系的 DNA 轉(zhuǎn)染，包括 HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 HeLa 細(xì)胞等，也可應(yīng)用于大規(guī)模重組蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn)等領(lǐng)域。

概述：PEI 是基因轉(zhuǎn)染中常用的高分子載體。PEI 是一種帶正電荷的陽離子聚合物，極易與帶負(fù)電的核酸分子結(jié)合形成復(fù)合物，該復(fù)合物再與細(xì)胞表面帶負(fù)電荷的蛋白多糖相互作用，通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。MCE PEI Transfection Reagent 是一種基于分子量 25 kDa PEI 的 DNA 轉(zhuǎn)染試劑，通過引入可特異性結(jié)合 DNA 的功能基因?qū)?PEI 進(jìn)行改性，顯著增強(qiáng)了 PEI 和 DNA 的結(jié)合能力，并且降低了細(xì)胞毒性。另外，通過功能性優(yōu)化顯著增強(qiáng)了 PEI 的細(xì)胞攝取、內(nèi)涵體逃逸等功能。MCE PEI Transfection Reagent 具有細(xì)胞毒性小、轉(zhuǎn)染效率高、穩(wěn)定性強(qiáng)及操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，在多種細(xì)胞系中都能實(shí)現(xiàn)高效、低毒的 DNA 轉(zhuǎn)染，包括 HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 HeLa 等細(xì)胞。高性價(jià)比使其可廣泛用于大規(guī)模重組蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn)等工業(yè)領(lǐng)域。

描述：

聚乙烯亞胺是基因轉(zhuǎn)染中常用的聚合物載體，由陽離子聚合物組成，可將核酸導(dǎo)入真核細(xì)胞。在聚合物轉(zhuǎn)染中，外源DNA與陽離子聚合物形成復(fù)合物，通過內(nèi)吞作用進(jìn)入宿主細(xì)胞。

MCE PEI轉(zhuǎn)染試劑是在25kDa PEI的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)而成，通過引入功能基因進(jìn)行修飾，增強(qiáng)DNA的結(jié)合能力，降低細(xì)胞毒性，同時(shí)修飾后的PEI的細(xì)胞攝取和內(nèi)體逃逸功能明顯增強(qiáng)。

MCE PEI轉(zhuǎn)染試劑高效、低毒、穩(wěn)定性強(qiáng)，適用于HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和HeLa等多種細(xì)胞，甚至適用于一些難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。還可應(yīng)用于大規(guī)模重組蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn)。

操作說明：1. 準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染細(xì)胞1.1 貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，將胰酶消化后的細(xì)胞進(jìn)行鋪板 (0.3-2 × 105 個(gè)細(xì)胞/孔)，至細(xì)胞密度達(dá)到 60-70% 進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染1.2 懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制轉(zhuǎn)染試劑-DNA 復(fù)合物之前，先進(jìn)行細(xì)胞鋪板，每 500 μL 生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入 2-5 × 105 個(gè)細(xì)胞。注：為提高轉(zhuǎn)染效率，建議使用生長(zhǎng)狀態(tài)良好且生長(zhǎng)處于指數(shù)期、存活率 >90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。2. 準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物2.1 取 1 μg 質(zhì)粒 DNA 至 1.5 mL EP 管中，加入 50 μL 無血清培養(yǎng)基（與培養(yǎng)體系一致，無血清無雙抗），輕柔混勻。2.2 取 2.5 μL PEI Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑加入到另一個(gè) 1.5 mL EP 管中，加入 50 μL 無血清培養(yǎng)基（與培養(yǎng)體系一致，無血清無雙抗）輕柔混勻。注：a) 通常情況下，DNA (μg) 和 PEI Transfection Reagent (μL) 的用量比例為 1:2.5。為提高轉(zhuǎn)染效果，可在 1:1-1:5 范圍內(nèi)調(diào)整以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。b) 最佳轉(zhuǎn)染條件因細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件不同而有所區(qū)別，可做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳轉(zhuǎn)染比例。2.3 將 2.1 轉(zhuǎn)移至 2.2 中，輕柔混勻（總體積為 100 μL），室溫孵育 30 min，即形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。注：該轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物在室溫下 4 h 內(nèi)仍保持穩(wěn)定。注： 細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)，可根據(jù)實(shí)際情況參考上表進(jìn)行等倍放大。3. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染將上述轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物 (100 μL) 加入每孔細(xì)胞，輕柔混勻，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。4. 分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng) 36-48 h 后，可使用熒光檢測(cè)法、Western Blot、ELISA、RT-PCR、流式細(xì)胞術(shù)、報(bào)告基因等檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果，或加入篩選藥物進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選。

注意事項(xiàng)：1. 轉(zhuǎn)染時(shí)，建議選用高純度、無菌、無污染、無內(nèi)毒素的優(yōu)質(zhì)的質(zhì)粒 DNA。質(zhì)粒中內(nèi)毒素會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率顯著下降，推薦配合選用 MCE 質(zhì)粒大量抽提試劑盒 ，提取質(zhì)粒純度更高，柱上去除內(nèi)毒素，操作簡(jiǎn)便。2. 細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率，為提高轉(zhuǎn)染效率，建議使用生長(zhǎng)狀態(tài)良好且生長(zhǎng)處于指數(shù)期、存活率 >90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。3. 轉(zhuǎn)染過程中，抗生素的存在可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低及細(xì)胞毒性，不建議在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中添加抗生素。4. 影響轉(zhuǎn)染效率的因素有很多，如細(xì)胞類型、細(xì)胞狀態(tài)及密度、核酸質(zhì)量及濃度、轉(zhuǎn)染試劑與核酸比例等，建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳轉(zhuǎn)染條件。5. 血清會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)染效果產(chǎn)生一定程度的干擾，為提高轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染過程中，建議使用無血清培養(yǎng)基。6. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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