蛋白轉(zhuǎn)染試劑
MCE 國際站：Protein Transfection Reagent
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲(chǔ)條件：20°C，1 年避免反復(fù)凍融
簡介：MCE Protein Transfection Reagent 是一種用于轉(zhuǎn)染蛋白質(zhì)、抗體以及多肽的陽離子高分子聚合物，可將蛋白直接遞送到細(xì)胞內(nèi)。
概述：MCE Protein Transfection Reagent 是一種用于轉(zhuǎn)染蛋白質(zhì)、抗體以及多肽的陽離子高分子聚合物，可將蛋白直接遞送到細(xì)胞內(nèi)。陽離子高分子轉(zhuǎn)染試劑與蛋白質(zhì)通過靜電、疏水及氫鍵等非共價(jià)相互作用形成的帶正電復(fù)合物，附著在帶負(fù)電荷的細(xì)胞表面，通過質(zhì)膜融合或內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，與核內(nèi)體結(jié)合后將蛋白釋放在細(xì)胞質(zhì)中，從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。MCE Protein Transfection Reagent 具有如下優(yōu)點(diǎn)：· 轉(zhuǎn)染效率高：轉(zhuǎn)染后 3-12 小時(shí)即可進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)原代細(xì)胞和難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞也有很高的轉(zhuǎn)染效率· 蛋白活性高：與蛋白非共價(jià)結(jié)合，遞送后的蛋白仍具有較高的生物活性· 適用范圍廣：適用于多種細(xì)胞類型，可與蛋白、肽和熒光標(biāo)記抗體一起使用· 細(xì)胞毒性低：作用溫和，生物相容性好· 操作簡便：實(shí)驗(yàn)簡單快速，無需分離、克隆和轉(zhuǎn)染基因序列
描述：
MCE 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子脂質(zhì)混合物，可與蛋白質(zhì)、肽、抗體和其他生物活性分子復(fù)合，從而實(shí)現(xiàn)它們直接的細(xì)胞內(nèi)遞送。試劑蛋白復(fù)合物附著在帶負(fù)電荷的細(xì)胞表面，要么直接與膜融合，將捕獲的蛋白質(zhì)運(yùn)送到細(xì)胞內(nèi)，要么被細(xì)胞內(nèi)吞，然后與內(nèi)體融合，將捕獲的蛋白質(zhì)釋放到細(xì)胞質(zhì)中。
MCE 蛋白轉(zhuǎn)染試劑的特點(diǎn)
快速蛋白質(zhì)遞送：孵育后 3 至 12 小時(shí)內(nèi)最佳遞送，對(duì)原代細(xì)胞和難轉(zhuǎn)染細(xì)胞具有高轉(zhuǎn)染效率。
高蛋白質(zhì)活性：遞送復(fù)合物是非共價(jià)的，使蛋白質(zhì)和多肽在遞送后保留生物活性。
多功能性：適用于多種細(xì)胞，可與蛋白質(zhì)、多肽和熒光標(biāo)記抗體一起使用。
低細(xì)胞毒性：作用溫和，生物相容性好
省時(shí)：無需分離、克隆和轉(zhuǎn)染基因序列。
操作說明：1.準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染細(xì)胞(1)貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，將消化后的細(xì)胞按照每孔 1-3 × 105 個(gè)細(xì)胞進(jìn)行鋪板，確保轉(zhuǎn)染時(shí)密度為 50%-100%。(2)懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復(fù)合物之前，先進(jìn)行細(xì)胞鋪板，每 500 μL 生長培養(yǎng)基中加入 2-6 × 105 個(gè)細(xì)胞。注：為提高轉(zhuǎn)染效率，建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期、存活率 > 90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。2.準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復(fù)合物(1)取 1-10 μg 蛋白加入到 1.5 mL 離心管中，加入 1-3 μL MCE Protein Transfection Reagent，輕柔混合均勻，室溫靜置孵育 3 min。注：蛋白質(zhì)實(shí)際用量需根據(jù)蛋白種類及實(shí)驗(yàn)類型進(jìn)行優(yōu)化。最佳轉(zhuǎn)染條件因細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件不同而有所區(qū)別（如熒光蛋白 GFP 建議用量 5-10 μg，熒光蛋白 Phycoerythrin 建議用量 0.5-2 μg，凋亡蛋白 Saporin 建議用量 0.1-1 μg），可做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索蛋白最佳用量。轉(zhuǎn)染試劑的體積應(yīng)根據(jù)蛋白濃度和培養(yǎng)皿的大小進(jìn)行調(diào)整注：細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)，可根據(jù)實(shí)際情況參考上表進(jìn)行等倍放大。(2)加 100 μL 無血清培養(yǎng)基 1，輕柔混勻，室溫靜置孵育 20 min，即為轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復(fù)合物。(3)加 400 μL 無血清培養(yǎng)基 2稀釋轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復(fù)合物，輕柔混勻。3.細(xì)胞轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復(fù)合物孵育期間，棄去細(xì)胞培養(yǎng)基，用 37°C 預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基或 1 × PBS 洗滌 2-3 次。將轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復(fù)合物 (500 μL) 輕輕滴加到每孔細(xì)胞中，輕柔混勻，培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。4.分析轉(zhuǎn)染效率培養(yǎng) 3-12 h 后，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選用熒光檢測(cè)法、Western Blot、ELISA、RT-PCR、流式細(xì)胞術(shù)、報(bào)告基因、免疫熒光染色等方案檢測(cè)分析轉(zhuǎn)染效果。注：培養(yǎng) 3 h 后補(bǔ)充轉(zhuǎn)染液或棄去轉(zhuǎn)染液用培養(yǎng)基替代（可選）；再檢測(cè)或可視化之前，可先用 37°C 預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基或 PBS 洗滌細(xì)胞 3-4 次，去除可能影響檢測(cè)結(jié)果的未轉(zhuǎn)染蛋白。
注意事項(xiàng)：1.為了獲得較高的轉(zhuǎn)染效率，建議選用高純度、高活性的蛋白。2.細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率，建議使用生長狀態(tài)良好且生長處于指數(shù)期、存活率 > 90% 的細(xì)胞進(jìn)行蛋白轉(zhuǎn)染。3.血清會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)染效果產(chǎn)生一定程度的干擾，為提高轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染過程中，建議使用無血清培養(yǎng)基。4.細(xì)胞暴露在轉(zhuǎn)染混合物中的時(shí)間長度將影響轉(zhuǎn)染效率。最佳的蛋白質(zhì)遞送時(shí)間需要摸索確定。一般情況下，肽和小分子蛋白在 2 h 左右進(jìn)入細(xì)胞，大多數(shù)酶和中等大小的蛋白質(zhì)在 3-3.5 h 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中，大分子蛋白質(zhì)、抗體或多聚體蛋白可能需要 5 h 或更長時(shí)間才能有效遞送。5.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。6.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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