One Step Yeast PCR kit 直擴(kuò)系列

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

ToloScript RT EasyMix for qPCR 包含新一代逆轉(zhuǎn)錄酶 ToloScript Reverse Transcriptase（RTase）和針對(duì)逆轉(zhuǎn)錄優(yōu)化的

適緩沖液，進(jìn)一步提高了 cDNA 合成的效率，適用于兩步法 qRT-PCR 檢測(cè)。試劑盒中的 5 × ToloScript qRT

EasyMix 含有逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的所有組分，加入模板 RNA 和水即可迅速進(jìn)行反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物兼容染料法與探針

法 qPCR，可進(jìn)行基因表達(dá)的高效分析。

One Step Yeast PCR kit 直擴(kuò)系列

適用范圍

高拷貝、低拷貝靶標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)，與 qPCR 聯(lián)用。

產(chǎn)品組成

組分

22105-01

RNase-free ddH2O

2 × 1 mL

5 × ToloScript qRT EasyMixa

400 μL

5 × No RT Control Mixb

One Step Yeast PCR kit 直擴(kuò)系列

保存條件

-20 ℃儲(chǔ)存。

質(zhì)量控制

純度檢測(cè)：所有組分經(jīng)檢測(cè)均無核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶及 RNase 殘留。

功能檢測(cè)：以 1 µg HeLa 細(xì)胞總 RNA 為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，通過 qPCR 檢測(cè) 4 個(gè)基因的表達(dá)量，Ct 值在批次間產(chǎn)

品中基本相同。在 1 µg HeLa 細(xì)胞總 RNA 中混入 100 ng 人 gDNA，經(jīng) 2-Step gDNA Erase-Out Mix 處理后加入 No

RT Control Mix，然后進(jìn)行 qRT-PCR，獲得的 Ct 值>40。

實(shí)驗(yàn)流程

1. 配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系

在 RNase-free 的離心管中配置如下體系，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × ToloScript qRT EasyMix

4 µL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

RT EasyMix for qPCR  

No RT Control 反應(yīng)(可選)

No RT Control 是指不加逆轉(zhuǎn)錄酶的陰性對(duì)照反應(yīng)，用于檢驗(yàn) RNA 模板中是否有 gDNA 殘留。

在 RNase-free 離心管中配制如下混合液，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × No RT Control Mix

4 µL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

2. 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

37 ℃*

15 min

85 ℃

5 sec

產(chǎn)物可立即用于 qPCR 反應(yīng)，或凍存于-20℃，并在半年內(nèi)使用；如需長(zhǎng)期存放，則建議將反轉(zhuǎn)錄 cDNA 產(chǎn)物分裝后

凍存于-80 ℃。cDNA 應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)

1. 由于 5 × ToloScript qRT EasyMix 及 5 × No RT Control Mix 中均含有高濃度的甘油，所以在使用前請(qǐng)短

暫離心，并輕彈（或用移液槍輕輕吸打混勻）后，準(zhǔn)確吸取。

2. 在 20 µL 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中建議加入不超過 1 µg 的 Total RNA。若目的基因的表達(dá)量非常低，則可以

多加入 5 µg 的 Total RNA；否則，如果加入 RNA 量過高，可能會(huì)超出后續(xù) qPCR 的線性范圍。

3. 本試劑盒制備的 cDNA 產(chǎn)物僅適用于 qPCR 反應(yīng)，不適用于進(jìn)行長(zhǎng)片段目的基因的 PCR 擴(kuò)增。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

ToloScript RT EasyMix for qPCR 包含新一代逆轉(zhuǎn)錄酶 ToloScript Reverse Transcriptase（RTase）和針對(duì)逆轉(zhuǎn)錄優(yōu)化的

適緩沖液，進(jìn)一步提高了 cDNA 合成的效率，適用于兩步法 qRT-PCR 檢測(cè)。試劑盒中的 5 × ToloScript qRT

EasyMix 含有逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的所有組分，加入模板 RNA 和水即可迅速進(jìn)行反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物兼容染料法與探針

法 qPCR，可進(jìn)行基因表達(dá)的高效分析。

適用范圍

高拷貝、低拷貝靶標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)，與 qPCR 聯(lián)用。

產(chǎn)品組成

組分

22105-01

RNase-free ddH2O

2 × 1 mL

5 × ToloScript qRT EasyMixa

400 μL

5 × No RT Control Mixb

保存條件

-20 ℃儲(chǔ)存。

質(zhì)量控制

純度檢測(cè)：所有組分經(jīng)檢測(cè)均無核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶及 RNase 殘留。

功能檢測(cè)：以 1 µg HeLa 細(xì)胞總 RNA 為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，通過 qPCR 檢測(cè) 4 個(gè)基因的表達(dá)量，Ct 值在批次間產(chǎn)

品中基本相同。在 1 µg HeLa 細(xì)胞總 RNA 中混入 100 ng 人 gDNA，經(jīng) 2-Step gDNA Erase-Out Mix 處理后加入 No

RT Control Mix，然后進(jìn)行 qRT-PCR，獲得的 Ct 值>40。

實(shí)驗(yàn)流程

1. 配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系

在 RNase-free 的離心管中配置如下體系，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × ToloScript qRT EasyMix

4 µL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

RT EasyMix for qPCR  

No RT Control 反應(yīng)(可選)

No RT Control 是指不加逆轉(zhuǎn)錄酶的陰性對(duì)照反應(yīng)，用于檢驗(yàn) RNA 模板中是否有 gDNA 殘留。

在 RNase-free 離心管中配制如下混合液，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × No RT Control Mix

4 µL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

2. 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

37 ℃*

15 min

85 ℃

5 sec

產(chǎn)物可立即用于 qPCR 反應(yīng)，或凍存于-20℃，并在半年內(nèi)使用；如需長(zhǎng)期存放，則建議將反轉(zhuǎn)錄 cDNA 產(chǎn)物分裝后

凍存于-80 ℃。cDNA 應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)

1. 由于 5 × ToloScript qRT EasyMix 及 5 × No RT Control Mix 中均含有高濃度的甘油，所以在使用前請(qǐng)短

暫離心，并輕彈（或用移液槍輕輕吸打混勻）后，準(zhǔn)確吸取。

2. 在 20 µL 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中建議加入不超過 1 µg 的 Total RNA。若目的基因的表達(dá)量非常低，則可以

多加入 5 µg 的 Total RNA；否則，如果加入 RNA 量過高，可能會(huì)超出后續(xù) qPCR 的線性范圍。

3. 本試劑盒制備的 cDNA 產(chǎn)物僅適用于 qPCR 反應(yīng)，不適用于進(jìn)行長(zhǎng)片段目的基因的 PCR 擴(kuò)增。