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中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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線(xiàn)粒體膜電位

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2024-10-18 16:01:16瀏覽次數(shù):1264次

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在細(xì)胞凋亡的過(guò)程中往往伴隨著線(xiàn)粒體跨膜電位的破壞,這被廣泛認(rèn)為是細(xì)胞凋亡過(guò)程中早發(fā)生的事件之一。線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)的有很多方法,JC-1的流式檢測(cè)是比較常見(jiàn)的一種方法。

一、服務(wù)介紹

  大量的研究表明線(xiàn)粒體與細(xì)胞凋亡密切相關(guān),其中線(xiàn)粒體跨膜電位(MMP)的下降,被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)程中早發(fā)生的事件之一。它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之前,一旦線(xiàn)粒體跨膜電位崩潰,則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。

  二、實(shí)驗(yàn)原理

  JC-1是一種碳氰化合物類(lèi)陽(yáng)離子熒光染料,可作為檢測(cè)線(xiàn)粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細(xì)胞內(nèi)以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在,分別處于不同的熒光發(fā)射峰。當(dāng)JC-1濃度低或膜電位水平低時(shí),主要以單體形式存在,激發(fā)波長(zhǎng)為527nm,呈綠色熒光;當(dāng)JC-1濃度升高或線(xiàn)粒體膜電位水平較高時(shí),形成聚合物,發(fā)出紅色的熒光,激發(fā)波長(zhǎng)為590nm。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),線(xiàn)粒體跨膜電位被去極化,JC-1從線(xiàn)粒體內(nèi)釋放,紅光強(qiáng)度減弱,以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光,根椐這一特征就可以檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位的變化。

  三、實(shí)驗(yàn)流程

  1.細(xì)胞培養(yǎng);

  2.用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡,同時(shí)設(shè)立陰性依照組合陽(yáng)性對(duì)照組,收集細(xì)胞;

  3.用PBS洗滌細(xì)胞三次,收集不多于1×106的細(xì)胞;

  4.取100μL10×IncubationBuffer加900μL滅菌去離子水稀釋成1×IncubationBuffer,混勻并預(yù)熱至37℃;

  5.吸取500μL1×IncubationBuffer,加入1μLJC-1,渦旋混勻配成JC-1工作液;

  6.取500μLJC-1工作液將細(xì)胞均勻懸浮,37℃,5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育15~20min。

  7.室溫離心(2000rpm,5min)收集細(xì)胞,用1×IncubationBuffer洗兩次;

  8.吸取500μL10×IncubationBuffer重新懸浮細(xì)胞;

  9.流式細(xì)胞儀檢測(cè),分析。

  四、客戶(hù)提供

  細(xì)胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細(xì)胞),相關(guān)藥品或MMP檢測(cè)試劑盒(可代購(gòu))!

  五、公司提供

  實(shí)驗(yàn)步驟、結(jié)果圖、數(shù)據(jù)結(jié)果和分析報(bào)告

  實(shí)驗(yàn)周期:1-2周,具體需要根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。



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