詳細(xì)介紹
慢病毒感染快速指南
1. 將目的細(xì)胞按 30%匯合度接種到 24 孔板,約 3-5×104細(xì)胞數(shù)/孔,不同細(xì)胞因?yàn)榧?xì)胞大小不同細(xì)胞數(shù)量會不同,快速指南以細(xì)胞數(shù)量為 5×104為例,加入 500uL wan全培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
2. 接種后 12-20h 感染陰性對照慢病毒(接種細(xì)胞至病毒感染細(xì)胞時間不宜太長,否則細(xì)胞增殖影響細(xì)胞密度不利用后期抗性篩選)。
3.加病毒量計(jì)算方法:(細(xì)胞數(shù)×MOI 值/病毒滴度)×103=病毒量(uL),加病毒量見下表。同時加入 Polybrene,每孔加 0.25uL,濃度為 10mg/mL Polybrene,細(xì)胞培養(yǎng)液中終濃度為5ug/mL。
4.感染 16-20h 后更換培養(yǎng)基,棄去培養(yǎng)基,每孔加入 500uL 新鮮的培養(yǎng)基。
5.感染后 48-96h 顯微鏡觀察熒光。(注:如果 48h-96h 期間細(xì)胞匯合度達(dá)到 100%,請及時傳代培養(yǎng))。
6.建議將 48 孔板細(xì)胞進(jìn)行傳代,傳代 12 孔板,后繼續(xù)觀察熒光,根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和熒光細(xì)胞比例綜合判斷細(xì)胞感染最佳 MOI 值。一般選擇細(xì)胞生長良好,感染效率 80%左右的感染條件作為最佳感染條件。(注:100%熒光感染不一定為細(xì)胞最佳 MOI 值,因?yàn)榭赡軙斐杉?xì)胞慢病毒感染拷貝數(shù)太高,影響細(xì)胞狀態(tài)。
1,3-十六烷酸甘油二酯 標(biāo)準(zhǔn)品
英文名稱 1,3-Dipalmitin(C16:0)
CAS 502-52-3
本公司主營試劑,原裝試劑,sigma ,自營品牌試劑,生化對照品,植物對照品。
1,3-十六烷酸甘油二酯 標(biāo)準(zhǔn)品
?本公司是國內(nèi)業(yè)務(wù)最為全面、產(chǎn)品與服務(wù)最為專業(yè)的優(yōu)質(zhì)生命科學(xué)公司之一,是一家集工業(yè)生產(chǎn),分子生物、生化試劑、常規(guī)試劑、常用耗材與進(jìn)口試劑代理的生命科學(xué)企業(yè)。本公司擁有一站式實(shí)驗(yàn)室采購服務(wù)能力,產(chǎn)品鏈供應(yīng)完備,涉及科研原料藥、標(biāo)準(zhǔn)品、信號通路研究靶點(diǎn)抑制劑、常用生化試劑、分子生物學(xué)試劑、分子生物學(xué)領(lǐng)域核酸純化及PCR相關(guān)產(chǎn)品、蛋白多類、常規(guī)通用試劑等超20萬種產(chǎn)品。目前,本公司的客戶網(wǎng)絡(luò)遍布全國及部分國外市場。對內(nèi),本公司長期為中科院、軍科院、醫(yī)科院、復(fù)旦大學(xué)、北大清華、等超5000家國內(nèi)科研機(jī)構(gòu)及相關(guān)企業(yè)提供優(yōu)質(zhì)服務(wù),好評不斷;對外,本公司極力為廣大科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù),我們始終以創(chuàng)新為導(dǎo)向,致力于為工業(yè)用戶,科研機(jī)構(gòu),提供高品質(zhì),低價格的客戶想要買到的理想產(chǎn)品。
慢病毒感染快速指南
1. 將目的細(xì)胞按 30%匯合度接種到 24 孔板,約 3-5×104細(xì)胞數(shù)/孔,不同細(xì)胞因?yàn)榧?xì)胞大小不同細(xì)胞數(shù)量會不同,快速指南以細(xì)胞數(shù)量為 5×104為例,加入 500uL wan全培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
2. 接種后 12-20h 感染陰性對照慢病毒(接種細(xì)胞至病毒感染細(xì)胞時間不宜太長,否則細(xì)胞增殖影響細(xì)胞密度不利用后期抗性篩選)。
3.加病毒量計(jì)算方法:(細(xì)胞數(shù)×MOI 值/病毒滴度)×103=病毒量(uL),加病毒量見下表。同時加入 Polybrene,每孔加 0.25uL,濃度為 10mg/mL Polybrene,細(xì)胞培養(yǎng)液中終濃度為5ug/mL。
4.感染 16-20h 后更換培養(yǎng)基,棄去培養(yǎng)基,每孔加入 500uL 新鮮的培養(yǎng)基。
5.感染后 48-96h 顯微鏡觀察熒光。(注:如果 48h-96h 期間細(xì)胞匯合度達(dá)到 100%,請及時傳代培養(yǎng))。
6.建議將 48 孔板細(xì)胞進(jìn)行傳代,傳代 12 孔板,后繼續(xù)觀察熒光,根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和熒光細(xì)胞比例綜合判斷細(xì)胞感染最佳 MOI 值。一般選擇細(xì)胞生長良好,感染效率 80%左右的感染條件作為最佳感染條件。(注:100%熒光感染不一定為細(xì)胞最佳 MOI 值,因?yàn)榭赡軙斐杉?xì)胞慢病毒感染拷貝數(shù)太高,影響細(xì)胞狀態(tài)。