詳細(xì)介紹
L-蘇an酸
英文名稱 : L-Threonine
CAS : 72-19-5
分子式 : C4H9NO3
分子量 : 119.12
儲(chǔ)存條件 : 干燥處避光存放
外觀(性狀) : 白色晶體或結(jié)晶性粉末,無(wú)臭,味微甜。
L-蘇an酸
慢病毒感染快速指南
1. 將目的細(xì)胞按 30%匯合度接種到 24 孔板,約 3-5×104細(xì)胞數(shù)/孔,不同細(xì)胞因?yàn)榧?xì)胞大小不同細(xì)胞數(shù)量會(huì)不同,快速指南以細(xì)胞數(shù)量為 5×104為例,加入 500uL wan全培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
2. 接種后 12-20h 感染陰性對(duì)照慢病毒(接種細(xì)胞至病毒感染細(xì)胞時(shí)間不宜太長(zhǎng),否則細(xì)胞增殖影響細(xì)胞密度不利用后期抗性篩選)。
3.加病毒量計(jì)算方法:(細(xì)胞數(shù)×MOI 值/病毒滴度)×103=病毒量(uL),加病毒量見(jiàn)下表。同時(shí)加入 Polybrene,每孔加 0.25uL,濃度為 10mg/mL Polybrene,細(xì)胞培養(yǎng)液中終濃度為5ug/mL。
4.感染 16-20h 后更換培養(yǎng)基,棄去培養(yǎng)基,每孔加入 500uL 新鮮的培養(yǎng)基。
5.感染后 48-96h 顯微鏡觀察熒光。(注:如果 48h-96h 期間細(xì)胞匯合度達(dá)到 100%,請(qǐng)及時(shí)傳代培養(yǎng))。
6.建議將 48 孔板細(xì)胞進(jìn)行傳代,傳代 12 孔板,后繼續(xù)觀察熒光,根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和熒光細(xì)胞比例綜合判斷細(xì)胞感染最佳 MOI 值。一般選擇細(xì)胞生長(zhǎng)良好,感染效率 80%左右的感染條件作為最佳感染條件。(注:100%熒光感染不一定為細(xì)胞最佳 MOI 值,因?yàn)榭赡軙?huì)造成細(xì)胞慢病毒感染拷貝數(shù)太高,影響細(xì)胞狀態(tài)。