詳細介紹
家兔皮膚成纖維細胞系從表觀正常的成年雌性可卡犬中建立了細胞株MDCK (ATCC CCL-34),從中克隆建立了狗上皮樣細胞株Super Tube。 當維持高細胞濃度時,Super tube形成大量的小管(據(jù)報道,24孔板的每孔鋪7x105細胞,3天內(nèi)就能形成小管)。 要形成小管,細胞需要每天兩次換液以提供足夠養(yǎng)分。 與原始細胞株相比,Super Tube的c-AMP的檢測水平低得多,在forskolin刺激下讀出的腺苷環(huán)化酶水平也低;它的跨上皮抗性也比Super Dome (ATCC CRL- 2286) 和 MDCK都低。
規(guī)格:5×105cells/瓶
培養(yǎng)條件:37℃,5% CO2,PH值7.2~7.4,無菌恒溫培養(yǎng)。
細胞數(shù)量:1× 106個
細胞傳代:1:4~1:6傳代;每周換液2~3次
細胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:DMEM(高糖) +10% FBS;37℃,5% CO2
傳代方法:建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:90%FBS+10%DMSO
細胞凍存:液氮凍存?????
T25瓶細胞處理方法
收到家兔皮膚成纖維細胞系后,檢查外包裝是否完整,細胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題,請即時聯(lián)系。并進行以下操作:
1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。
2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3. 預(yù)熱*培養(yǎng)基(含1%雙抗)。
4. 顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存(40×,100×,200×各一張)。
5. ①若細胞密度較小,無菌操作,去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度達到80%以上,進行傳代。
②若細胞密度較大,達到80%以上,將細胞傳代培養(yǎng)。
注:
培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%,建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基。由于運輸過程中的問題,細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況,這時請在拍照后將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基。(這里是針對原來*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況,如果原來FBS濃度是20%,可以增加到25%FBS濃度) 收到細胞后如細胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問題,請當天反饋并提供圖片,且保存前三天照片以便分析。7天內(nèi)反饋,細胞本身問題免費重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實際情況酌情處理;7天內(nèi)未接到任何反饋視為合格,不予免費售后。
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