MTT檢測試劑盒及特點(diǎn)MTT 廣泛用于檢測細(xì)胞生長，其原理是 MTT 可以被活細(xì)胞線粒體內(nèi)的脫
氫酶還原生成深紫色的 formazan 結(jié)晶，而死細(xì)胞則無此活性。深紫色的
formazan 結(jié)晶被溶解后可以通過測定 490 nm 波長的光吸收而測定出其濃
度，并由此推測出細(xì)胞的活力，細(xì)胞增殖越旺盛，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越
大，則吸光度越低。

MTT檢測試劑盒其原理如下：
該方法廣泛用于細(xì)胞活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)和腫瘤放
射敏感試驗(yàn)等。本產(chǎn)品的特點(diǎn)如下：
1. 采用*的 Formazan 溶解液，可以充分溶解 formazan，減少誤差。
2. 背景低，靈敏度高，線性范圍寬，重復(fù)性好。
3. 本產(chǎn)品為足夠 500 次（5 個(gè) 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板）微孔板檢測。
4. 可用于生物活性因子活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)、腫瘤放
射敏感性測定等。
規(guī)格及成分 成 份 編 號
500 次塑料袋包裝
（CAT#: 111105-500）
溶液 A 111105A 5 mL（棕色瓶）
溶液 B 111105B 50 mL
使用手冊 111105sc 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存（但溶液 B 也可以常溫運(yùn)輸和保存），有效期一年。
自備試劑 細(xì)胞培養(yǎng)基
使用方法 下面操作是檢測細(xì)胞毒性的試驗(yàn)，其他應(yīng)用跟此類似或更簡單（如生長曲線試
驗(yàn)），操作步驟可以以此為基礎(chǔ)稍作修改即可，故不再贅述。
一：接種細(xì)胞
1. 按常規(guī)胰酶消化法消化匯合的單層細(xì)胞，收集到含血清的培養(yǎng)基中。
2. 200 g 離心 5 分鐘收集細(xì)胞沉淀。
3. 用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸浮液并計(jì)數(shù)。
4. 將細(xì)胞稀釋到 2.5×103個(gè)/mL-5×104個(gè)/mL 之間（需要根據(jù)細(xì)胞的生
長速度決定），如果不知道生長數(shù)度，一般可以稀釋到 1×104個(gè)/mL。
5. 將足夠量的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中（便于用排槍取樣）。一個(gè) 96 孔板的
MTT 檢測需要約 20 mL 的細(xì)胞懸液。
6. 用排槍在 96 孔板除的第 2-11 列各孔正中央加入 200 uL 細(xì)胞懸液（對
正常細(xì)胞）。如果是腫瘤細(xì)胞，則加入 100 uL 腫瘤細(xì)胞懸液和 100 uL
培養(yǎng)基（總體積為 200 uL）。注意：一定要把細(xì)胞加在孔的正中，否則細(xì)
胞會(huì)聚集在孔的角落處，影響試驗(yàn)。
7. 用排槍在 96 孔板除的第 1 和第 12 各孔中加入跟細(xì)胞懸液等體積的培養(yǎng)
基。第 1 列各孔將作為+培養(yǎng)基-細(xì)胞+MTT 對照（用于測 OD 時(shí)調(diào)零），
第 12 列加培養(yǎng)基的作用是減少邊緣效應(yīng)對第 11 列反應(yīng)的影響。
8. 按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法在 37℃和 5%CO2條件下孵育 1-3 天，使細(xì)胞進(jìn)入
指數(shù)生長期。
二：藥物處理
9. 用培養(yǎng)基將藥物稀釋到 8 個(gè)待測濃度（如果不知道待測濃度，則需要預(yù)試
驗(yàn)確定），一般一種藥物需要做 3 塊平行板。
10. 去除第 2 到第 11 列（共 10 列）各孔中的培養(yǎng)基（不要觸動(dòng)細(xì)胞），保留
第 1 列和第 12 列各孔中的培養(yǎng)基。
11. 在第 2 和第 11 列（共 2 列）的各孔中加入 200 uL 新鮮培養(yǎng)基，這些孔
將作為+培養(yǎng)基+細(xì)胞-藥物的對照。
12. 在第 3 到第 10 列（共 8 列）各孔中加入 8 個(gè)濃度梯度的待測藥物，每列
加入一個(gè)濃度的藥物。
13. 按常規(guī)方法把 96 孔板繼續(xù)放在在 37℃和 5% CO2條件下孵育一定的時(shí)
間，此段時(shí)間即為藥物處理細(xì)胞的時(shí)間，由用戶自己決定。
14. 處理結(jié)束后去除第 2 到第 11 列（共 10 列，均含細(xì)胞）所有孔中的培養(yǎng)
基，并再加入 100 uL 新鮮培養(yǎng)基。
15. 每天換培養(yǎng)使細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)增 2-3 倍（所需時(shí)間隨細(xì)胞不同而不同）。
三：存活細(xì)胞計(jì)數(shù)
16. 在生長末期，去除第 1 到第 11 列各孔中的培養(yǎng)基后，再加入 100 uL 新
鮮培養(yǎng)基和 10 uL 溶液 A（含 MTT 成分），用錫箔包裹住 96 孔板后放
在 37℃和 5% CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng) 4-8 小時(shí)。注意：溶液 A 在低溫情況
下會(huì)凝固，使用前請室溫放置或 20-25℃水浴至全部溶解，搖勻后使用。
MTT 有致癌性，一定要帶手套操作。
17. 小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)基（含溶液 A）。由于培養(yǎng)基可能會(huì)影響光吸收，zui
盡可能去除。
18. 每孔加入 100 uL 溶液 B，置搖床上低速振蕩 10 分鐘，使 MTT 形成的
formazan 結(jié)晶物充分溶解。
19. 由于產(chǎn)物不穩(wěn)定，故需要立即在酶聯(lián)免疫檢測儀上選擇 490 nm 測定吸光
度。注意：用第 1 列各孔（+培養(yǎng)基-細(xì)胞+MTT 對照）調(diào)零。
20. 計(jì)數(shù)同樣處理的各次重復(fù)的平均值。
21. 以藥物濃度為橫軸，以吸光度為縱軸繪制曲線。由于各處理吸光度值
差別很大，一般需將其轉(zhuǎn)化成生長抑制率（以不加藥物的第 2 和第 11 列
各孔數(shù)據(jù)的平均數(shù)作為 100%），這樣便于計(jì)算出 IC50，用于各種藥物處
理效果的比較。

注意：如果測生長曲線，則以時(shí)間為橫軸。正常生長曲線
一般呈現(xiàn) S 型，具有促進(jìn)作用的則斜率加大。