通用型RT-LAMP恒溫擴增試劑盒可以用于 RT-LAMP 等溫擴增，RT-LAMP 即逆轉(zhuǎn)錄和Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導等溫擴增）的結合，專門用于快速擴增 RNA。LAMP 是 2000 年才出現(xiàn)的一種新穎的等溫核酸擴增方法。它利用 4 或 6 條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的 DNA 聚合酶，在等溫條件下(63℃左右) 30－60 分鐘完成擴增。該技術在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上能媲美甚至優(yōu)于 RT-PCR 技術，同時還不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、電泳及紫外觀察等過程，不依賴任何專門的儀器設備。目前已成功應用于人類及動植物、細菌、病毒、寄生蟲、真菌等病原體的快速檢測。

通用型RT-LAMP恒溫擴增試劑盒具有下列特點：
1. 高特異性，由于同時使用 4-6 條特異引物，所以特異性比 RT-PCR 更高。
2. 高擴增效率，擴增效率可達到 10E9-10E10，比 PCR 靈敏一個數(shù)量級，
可檢測到單拷貝的 RNA 分子
3. 65℃左右完成 RT 和 LAMP 擴增，不需要貴重的熱循環(huán)儀。
4. 即開即用，包含了除引物和模板 RNA 外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼檢測擴增結果，不需要昂貴的電泳、熒光 PCR 等儀器。
6. 提供擴增對照，便于在遇到困難時分析原因。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 小扁盒包裝
RT-LAMP Mix（2×） 101114a 0.5 mL
AMV-Bst 混合液 101114b 75 uL
對照引物混合物 101114c 10 uL
對照模板 101114d 10 uL
MgCl2溶液，25 mM 90302 0.2 mL
RNase-free 水 80403 1 mL
使用手冊 101114sc 1 份
注：RT-LAMP Mix（2×）稀釋到 1×時，已經(jīng)有 8mM Mg2+，本試劑盒提
供的 MgCl2（25 mM）用于用戶優(yōu)化條件用。
運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
自備試劑 RNA 模板及 RT-LAMP 引物（4 或 6 條）
使用方法 1. 在冰上溶解除酶外的各種組份，混勻，稍離心。在反應管中加入以下組
份：
成份 樣品管 陰性對照
RT-LAMP Mix（2×） 10 uL 10 uL
自備 FIP 引物終濃度 0.8 uM 0.8 uM
自備 BIP 引物終濃度 0.8 uM 0.8 uM
自備 F3 引物終濃度 0.2 uM 0.2 uM
自備 B3 引物終濃度 0.2 uM 0.2 uM
自備 Loop F 引物終濃度（可選項） 0.4 uM 0.4 uM
自備 Loop B 引物終濃度（可選項） 0.4 uM 0.4 uM
自備模板 RNA 1-100ng 不加
AMV-Bst 混合液 1.5 uL 1.5 uL
補水到 20 uL 20 uL
注：如在反應管中加入本公司PCR級綠如藍染料1uL（水則少加1 uL），則
可直接在熒光定量PCR儀中進行熒光定量檢測。
2. 混勻，置于60-65℃保溫30-120分鐘。注意：如果不使用Loop引物，則
保溫120分鐘；如果使用Loop引物，則保溫30分鐘。
3. 80℃10分鐘滅活Bst DNA聚合酶。此酶有外切酶活性，所以必須滅活。
4. 產(chǎn)物置于-20℃?zhèn)溆没蛄⒓从糜谙掠螜z測。擴增產(chǎn)物可選下列方法之一檢
測:
1) 瓊脂糖凝膠電泳。取擴增產(chǎn)物5 uL，1-2%的瓊脂糖凝膠電泳，可
見LAMP特征性電泳圖譜；
2) 向擴增產(chǎn)物中直接加入本公司PCR級綠如藍染料（另售）1 uL，混
勻，稍離心。將反應管置于紫外透射儀或凝膠成像系統(tǒng)中，紫外燈
下可見綠色熒光產(chǎn)生；
3) 熒光定量檢測。
5. 結果分析：
1) 如果沒有擴增，則需要用本試劑提供的陽性對照進行擴增。本試劑
盒提供陽性對照，反應按下表設置：
成份 陽性對照管
RT-LAMP Mix（2×） 10 uL
對照引物混合物 2 uL
對照模板 2 uL
AMV-Bst 混合液 1.5 uL
水 4.5 uL
混勻后，置于60℃保溫120分鐘，其余操作同上。注意：本對照引物
中沒有Loop引物，所以zui保溫120分鐘。
如果陽性對照能夠擴增出，則說明試劑盒沒有問題，可能是模板或引
物的問題。如果陽性對照沒有擴增出條帶，則是試劑盒的問題，請跟
廠家。
注意事項 注意事項：
1. 引物設計對成功擴增十分關鍵。除用于 SNP 分型外，盡量以保守區(qū)
設計引物。
2. 引物至少包括 F3/B3 和 FIP/BIP，加入環(huán)狀引物 F loop/B loop
可以使反應速度大大提高。
3. 應優(yōu)化引物序列、GC 含量和盡量避免二級結構。
4. 反應中各個引物的濃度及比例對擴增效果有一定的影響。
5. 建議先將所有引物混合在一起，配制成 10?濃度以方便使用。
6. LAMP 擴增具有特異性好、靈敏度高、時間快、不需要特殊儀器設
備等優(yōu)點。但太高的靈敏度使得其比普通 PCR 擴增更加容易污染導
致假陽性。因此，必須高度重視擴增產(chǎn)物的污染。常規(guī)措施包括嚴
格的實驗分區(qū)、添加 UNG 和 dUTP（可能導致反應效率下降）、使
用熒光定量等不開蓋檢測方法。實驗室一旦遭到污染，所有相關試
劑必須全部更換，必要時還得更換實驗室。
7. 要確證擴增的為目標基因，可以使用特定的限制性酶切和/或
Southern 雜交。
8. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床治療、食品等用途。
關聯(lián)產(chǎn)品 Bst DNA 聚合酶，通用型 LAMP 擴增試劑盒