通用型禽流感病毒RT-PCR檢測試劑盒用于微量沉淀濃縮蛋白質(zhì)樣品，其原理是通過酸使蛋白質(zhì)變性，溶解
度降低，在離心條件下沉淀，而達(dá)到蛋白變性、蛋白濃縮、蛋白去鹽的目的。他們
還有一個(gè)重要的用途是去除污染的鹽離子和其他小分子。本系列產(chǎn)品名單如下：
產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 zui低濃度 備注
81217A TCA 蛋白沉淀濃縮試劑 5ug/mL zui常用酸沉淀法
81217B TCA-DOC 蛋白沉淀濃縮試劑 1ug/mL 樣品不得含 SDS
通用型禽流感病毒RT-PCR檢測試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1. 操作方便迅速，只需要混勻后離心，不需要其他儀器。
2. 產(chǎn)品穩(wěn)定，可室溫長期放置。
3. 可以處理各種液體樣品（如細(xì)胞或細(xì)菌培養(yǎng)物，細(xì)胞裂解物，蛋白質(zhì)提取物等
等）。
4. 濃縮效果強(qiáng)，可濃縮濃度低達(dá) 1ug/mL 的蛋白。
5. 可用于含 SDS 的樣品，但靈敏度稍低（5 ug/mL）。
6. 得到的蛋白質(zhì)可用于后續(xù)的 SDS-PAGE、免疫沉淀和質(zhì)譜分析等實(shí)驗(yàn)。但蛋
白已經(jīng)變性，沒有活性。
規(guī)格及成分 成份 編號 50 次包裝
溶液 A 81217A 0.5mL
溶液 B 81217B 1 mL
溶液 C 81217C 50 mL
使用手冊 81217sc 1 份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。
自備試劑 1M Tris-HCl，pH8.8（也許會(huì)用到）
使用方法 使用方法一（用于不含 SDS 的樣品，但樣品蛋白濃度不能低于 1 ug/mL）
1、 將100 μL需要沉淀濃縮的蛋白樣品轉(zhuǎn)移到一個(gè)自備的1.5 mL塑料離心管中。
2、 加入 10 μL 溶液 A，渦旋激烈震蕩 10-30 秒混勻。
3、 冰上放置 15 分鐘。
4、 加入 10 μL 溶液 B，輕輕混勻。
5、 冰上放置 60 分鐘。
6、 4℃12000-15000×g 離心 10 分鐘。
7、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
8、 加入 1 mL 冰浴的溶液 C，震蕩混勻后 4℃12000-15000×g 離心 15 分鐘。
9、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
10、短暫離心，小心移棄殘留上清液后，將有蛋白沉淀的離心管敞開放置在冰上，
空氣晾干。一般需要 10 分鐘左右。
11、樣品放 4℃保存或立即電泳檢測?？芍苯佑?1×SDS-PAGE 上樣液或其他電
泳緩沖液溶解蛋白沉淀，取適量上樣。如果藍(lán)色的溴酚藍(lán)染料變黃，則說明有
殘留酸性物質(zhì) TCA 污染，必須加少量自備的 1M Tris-HCl（pH8.8）緩沖液，
直到顏色變成藍(lán)色為止，否則將影響電泳結(jié)果。
使用方法二（用于含 SDS 的樣品，但樣品蛋白濃度不能低于 5 ug/mL）
1、 將 200 μL 需要沉淀濃縮的蛋白樣品（濃度不低于 5ug/mL）轉(zhuǎn)移到一個(gè)自備
的 1.5 mL 塑料離心管中。
2、 加入 8 μL 溶液 B，渦旋激烈震蕩 10-30 秒混勻。
3、 冰上放置 30 分鐘或-20℃放置 15 分鐘（過夜放置更好）。
4、 4℃ 12000-15000×g 離心 15 分鐘。
5、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
6、 加入 1 mL 冰浴的溶液 C，震蕩混勻后 4℃ 12000-15000×g 離心 15 分鐘。
7、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
8、 短暫離心，小心移棄殘留上清液后，將有蛋白沉淀的離心管敞開放置在冰上，
空氣晾干。一般需要 10 分鐘左右。
9、 樣品放 4℃保存或立即電泳檢測?？芍苯佑?1×SDS-PAGE 上樣液或其他電
泳緩沖液溶解蛋白沉淀，取適量上樣。如果藍(lán)色的溴酚藍(lán)染料變黃，則說明有
殘留酸性物質(zhì) TCA 污染，必須加少量自備的 1M Tris-HCl（pH8.8）緩沖液，
直到顏色變成藍(lán)色為止，否則將影響電泳結(jié)果。
技術(shù)資料 TCA 與蛋白質(zhì)TCA 與蛋白質(zhì)之間主要有以下幾個(gè)方面的作用:①在酸性條件下與蛋白質(zhì)形成不溶
性鹽.②作為蛋白質(zhì)變性劑使蛋白質(zhì)構(gòu)象發(fā)生改變，暴露出較多的疏水性基團(tuán)，使
之聚集沉淀.③隨著蛋白質(zhì)分子量的增大，其結(jié)構(gòu)復(fù)雜性與致密性越大，TCA 可能
滲入分子內(nèi)部而使之較難被*除去，在電泳前樣品加熱處理時(shí)可能使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)
發(fā)生酸水解而形成碎片，而且隨時(shí)間的延長這一作用愈加明顯.④電泳圖譜顯示，
BSA，HSA 單體譜帶有較明顯的展寬現(xiàn)象，這可能是由于 TCA 的結(jié)合，使 SDS
與蛋白質(zhì)的結(jié)合量產(chǎn)生偏差，從而造成蛋白質(zhì)所帶電荷的不均一性，造成遷移率的
不*.我們認(rèn)為在電泳時(shí)使用 TCA 對蛋白質(zhì)樣品的濃縮或除鹽時(shí)，對于分子質(zhì)量
大的蛋白質(zhì)，要慎重選擇 TCA.對小分子量蛋白質(zhì)的濃縮