液體樣品蛋白純化回收試劑盒專門用于對液體樣品進行蛋白提取濃縮、脫鹽、脫去垢劑、脫還原劑等。
液體樣品蛋白純化回收試劑盒具有下列特點：
1. 適用于各種液體樣品，包括蛋白溶液、胞漿提取液、胞核提取液、細胞或微生
物培養(yǎng)基上清液、血液、尿液、腦脊液等。也適于原代或傳代細胞懸液。
2. 靈敏，對一般蛋白樣品，zui低濃度可達 1ug/mL；對含 SDS 的樣品，zui低濃
度為 5 ug/mL。
3. 蛋白回收率 95-100%，遠高于經(jīng)典的丙酮或三氯醋酸沉淀法，且可有效去除
樣品中的脂質(zhì)，不影響后續(xù) SDS-PAGE 和 Western Blot 等生物實驗
4. 得到的蛋白質(zhì)可用于后續(xù)的 SDS-PAGE、免疫沉淀和質(zhì)譜分析等實驗。但蛋
白已經(jīng)變性，沒有活性。
5. 能有效去除液體樣品中的鹽(1M)、還原劑(1%巰基乙醇或 DTT)、去垢劑
(5%SDS、1% Triton X-100、1% NP-40)和油脂等。
6. 操作方便迅速，只需要混勻后離心，不需要其他儀器。
7. 產(chǎn)品穩(wěn)定，可室溫長期放置。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 50 次小紙盒包裝
溶液 A 121208A 0.5mL
溶液 B 121208B 1 mL
溶液 C 121208C 50 mL
使用手冊 121208sc 1 份
運輸及保存 常溫運輸和保存，有效期一年。
自備試劑 1M Tris-HCl，pH8.8（也許會用到）
使用方法 使用方法一（用于不含 SDS 的液體樣品，但樣品蛋白濃度不能低于 1 ug/mL）
1、 將 100 μL 需要液體蛋白樣品轉(zhuǎn)移到一個自備的 1.5 mL 塑料離心管中。
2、 加入 10 μL 溶液 A，渦旋激烈震蕩 10-30 秒混勻。
3、 冰上放置 15 分鐘。
4、 加入 10 μL 溶液 B，輕輕混勻。
5、 冰上放置 60 分鐘。
6、 4℃12000-15000×g 離心 10 分鐘。
7、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
8、 加入 1 mL 冰浴的溶液 C，震蕩混勻后 4℃12000-15000×g 離心 15 分鐘。
9、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
10、短暫離心，小心移棄殘留上清液后，將有蛋白沉淀的離心管敞開放置在冰上，
空氣晾干。一般需要 10 分鐘左右。
11、樣品放 4℃保存或立即電泳檢測?？芍苯佑?1×SDS-PAGE 上樣液或其他電
泳緩沖液溶解蛋白沉淀，取適量上樣。如果藍色的溴酚藍染料變黃，則說明有
殘留酸性物質(zhì)污染，必須加少量自備的 1M Tris-HCl（pH8.8）緩沖液，直到
顏色變成藍色為止，否則將影響電泳結(jié)果。
使用方法二（用于含 SDS 的液體蛋白樣品，但樣品蛋白濃度不能低于 5 ug/mL）
1、 將 200 μL 液體蛋白樣品轉(zhuǎn)移到一個自備的 1.5 mL 塑料離心管中。
2、 加入 8 μL 溶液 B，渦旋激烈震蕩 10-30 秒混勻。
3、 冰上放置 30 分鐘或-20℃放置 15 分鐘（過夜放置更好）。
4、 4℃ 12000-15000×g 離心 15 分鐘。
5、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
6、 加入 1 mL 冰浴的溶液 C，震蕩混勻后 4℃ 12000-15000×g 離心 15 分鐘。
7、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
8、 短暫離心，小心移棄殘留上清液后，將有蛋白沉淀的離心管敞開放置在冰上，
空氣晾干。一般需要 10 分鐘左右。
9、 樣品放 4℃保存或立即電泳檢測?？芍苯佑?1×SDS-PAGE 上樣液或其他電
泳緩沖液溶解蛋白沉淀，取適量上樣。如果藍色的溴酚藍染料變黃，則說明有
殘留酸性物質(zhì)污染，必須加少量自備的 1M Tris-HCl（pH8.8）緩沖液，直到
顏色變成藍色為止，否則將影響電泳結(jié)果。
技術(shù)資料 TCA 與蛋白質(zhì)
TCA 與蛋白質(zhì)之間主要有以下幾個方面的作用:①在酸性條件下與蛋白質(zhì)形成不溶
性鹽.②作為蛋白質(zhì)變性劑使蛋白質(zhì)構(gòu)象發(fā)生改變，暴露出較多的疏水性基團，使
之聚集沉淀.③隨著蛋白質(zhì)分子量的增大，其結(jié)構(gòu)復(fù)雜性與致密性越大，TCA 可能
滲入分子內(nèi)部而使之較難被*除去，在電泳前樣品加熱處理時可能使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)
發(fā)生酸水解而形成碎片，而且隨時間的延長這一作用愈加明顯.④電泳圖譜顯示，
BSA，HSA 單體譜帶有較明顯的展寬現(xiàn)象，這可能是由于 TCA 的結(jié)合，使 SDS
與蛋白質(zhì)的結(jié)合量產(chǎn)生偏差，從而造成蛋白質(zhì)所帶電荷的不均一性，造成遷移率的
不*.我們認為在電泳時使用 TCA 對蛋白質(zhì)樣品的濃縮或除鹽時，對于分子質(zhì)量
大的蛋白質(zhì)，要慎重選擇 TCA.對小分子量蛋白質(zhì)的濃縮，采用 TCA 時也有兩點
需要

注意:一是用 TCA 沉淀后，盡量用丙酮*抽提 TCA;二是樣品處理后要盡快
進行電泳分析，以免發(fā)生聚集及斷裂，造成結(jié)果分析的不準確.