詳細介紹
ATP檢測試劑盒(ATP Assay Kit)可以用于檢測普通溶液、細胞或組織內(nèi)的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。細胞和組織樣品一步裂解即可完成樣品制備,檢測靈敏度高達1nM,化學發(fā)光可以持續(xù)穩(wěn)定達30分鐘,并且獲得的樣品還可以同時進行Western檢測。
ATP,作為zui重要的能量分子,在細胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP水平的改變,會影響細胞的功能。通常細胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下,ATP水平會下降;而高葡萄糖刺激等可上調(diào)某些細胞的細胞內(nèi)ATP水平。通常ATP水平的下降表明線粒體的功能受損或下降,在細胞凋亡時ATP水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時發(fā)生。
ATP檢測試劑盒根據(jù)螢火蟲螢光素酶(firefly luciferase,也稱熒光素酶)催化螢光素產(chǎn)生螢光時需要ATP提供能量研制而成。當螢火
蟲螢光素酶和螢光素都過量時,在一定的濃度范圍內(nèi)螢光的產(chǎn)生和ATP的濃度成正比。這樣就可以高靈敏地檢測溶液中的ATP濃度。
樣品制備簡單。本試劑盒提供了可以用于細胞和組織裂解的ATP檢測裂解液,簡單裂解后即可用于ATP檢測。無需進行高氯酸或三氯(TCA)抽提,或樣品裂解后的煮沸等繁瑣操作。
靈敏度高,線性范圍寬,在1nM至10μM范圍內(nèi)有良好檢測效果。本試劑盒在樣品體積為100微升時可以檢測濃度低達1nM的ATP。而常規(guī)的細胞或組織裂解液中ATP的濃度為0.1-1μM,一些常見細胞的細胞內(nèi)ATP水平約為10nmol/mg蛋白。并且本試劑盒的檢測濃度范圍非常寬,檢測上限可以高達10μM,并在1nmol/L-10μM范圍內(nèi)可以形成良好的標準曲線。
讀數(shù)穩(wěn)定。本試劑盒進行了特殊的優(yōu)化設(shè)計,使檢測ATP時的化學發(fā)光非常穩(wěn)定。對于ATP標準曲線的檢測結(jié)果顯示,在開始反應(yīng)后10分鐘內(nèi)化學發(fā)光無明顯下降,開始反應(yīng)后30分鐘內(nèi)化學發(fā)光的下降不超過10%。
制備的樣品兼容性好。使用本試劑盒中的ATP檢測裂解液裂解獲得的細胞或組織樣品,不僅可以用于ATP檢測,還可用于檢測蛋白濃度、進行SDS-PAGE或一些常規(guī)的較易溶解蛋白的Western檢測。
使用方便快捷。通常10-20個樣品可以在30-60分鐘內(nèi)測定完畢。
三款的主要特點和差異如下:
產(chǎn)品編號 S0026 S0026B S0027
檢測靈敏度 ++++ +++ +++++
特殊樣品兼容性 ++++ +++++ ++++
信號值 ++++ +++ +++++
信號穩(wěn)定性 +++++ ++++ +++++
檢測下限(ATP) 1nM 5nM 0.1nM
檢測上限(ATP) 10μM 10μM 10μM
線性范圍(ATP) 1nM-10μM 10nM-10μM 0.1nM-10μM
推薦指數(shù) ++++ +++ +++++
期刊Cell發(fā)表的論文中注明使用了本產(chǎn)品(Cell. 2014 Jul 31;158(3):607-19)。
一個包裝的本試劑盒至少可以檢測200個樣品。
包裝清單:
產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
S0026-1 ATP檢測試劑 2ml(0.5ml/管,共4管)
S0026-2 ATP檢測試劑稀釋液 20ml
S0026-3 ATP標準溶液(0.5mM) 0.1ml
S0026-4 ATP檢測裂解液 100ml
— 說明書 1份
保存條件:
-20℃保存,半年有效。-70℃保存,一年有效。ATP檢測試劑需避光保存。
注意事項:
ATP檢測試劑中含有螢光素酶,反復(fù)凍融會導致其逐漸失活。盡管經(jīng)測試ATP檢測試劑反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無明顯影響,為取得較好的使用效果,建議用戶使用時的凍融次數(shù)不宜超過3次。ATP檢測試劑稀釋成ATP檢測工作液后,一次用完,不宜凍存后再使用。
ATP,特別是裂解后樣品中的ATP在室溫不太穩(wěn)定,需在4℃或冰上操作。ATP在冰上可以穩(wěn)定長達6小時。
本試劑盒需使用luminometer,即化學發(fā)光儀(檢測螢光素酶報告基因時所用的儀器)。如果沒有l(wèi)uminometer,也可以使用液閃儀。液閃儀的測定效果取決于液閃儀的檢測靈敏度和檢測精度。
使用可檢測化學發(fā)光的多功能酶標儀時,推薦使用孔和孔之間不透光的96孔白板或黑板。如使用普通的透明96孔板,須特別注意在檢測孔之間設(shè)置間隔孔,以減少鄰近孔之間的相互干擾。對于透明96孔板,一個發(fā)光孔可以使上下或左右鄰近孔的RLU值升高該孔的10-20%左右,使上下或左右間隔一個孔的鄰近孔的RLU值升高該孔的1%-4%左右;對于相同的樣品,底部不透光的96孔白板的化學發(fā)光讀數(shù)可以達到透明96孔板的5-10倍左右,達到底部透光96孔白板讀數(shù)的3倍左右(實測數(shù)據(jù)會因96孔板、檢測儀器和樣品等的不同而存在差異)。
本試劑盒提供的ATP檢測裂解液可以有效裂解并釋放常見的培養(yǎng)細胞和組織中的ATP。對于一些特殊的組織或樣品,如果發(fā)現(xiàn)檢測出來的ATP水平顯著低于預(yù)期水平,可以在裂解樣品后并且在離心前,取部分樣品煮沸2分鐘以充分釋放ATP。煮沸后樣品中的蛋白會變性,從而會在后續(xù)的離心步驟中被沉淀,因此煮沸的樣品不能用于蛋白濃度測定、SDS-PAGE和Western檢測??梢允褂檬S嗟牟糠謽悠愤M行蛋白濃度測定、SDS-PAGE和Western檢測。
僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。