環(huán)氧化酶-2（COX-2）抑制劑篩選試劑盒（Cyclooxygenase 2 Inhibitor Screening Kit，也稱(chēng)COX-2 Inhibitor Screening Kit）是一種利用熒光檢測(cè)，簡(jiǎn)單、快速、靈敏地用于人COX-2抑制劑高通量篩選的試劑盒。

環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑篩選試劑盒(Cyclooxygenase 2 Inhibitor Screening Kit，也稱(chēng)COX-2 Inhibitor Screening Kit)是一種利用熒光檢測(cè)，簡(jiǎn)單、快速、靈敏地用于人COX-2抑制劑高通量篩選的試劑盒。
      環(huán)氧化酶(cyclooxygenase, COX)又稱(chēng)前列腺素內(nèi)氧化酶合成酶(Prostaglandin-endoperoxide synthase, PTGS)，是一種同時(shí)具有環(huán)氧化酶和過(guò)氧化氫酶活性的雙功能酶。例如，COX的環(huán)氧化酶活性可以催化花生四烯(Arachidonic Acid, AA)轉(zhuǎn)化為前列腺素G2(prostaglandin G2, PGG2)，而COX的過(guò)氧化氫酶活性又可以將前列腺素G2轉(zhuǎn)化為前列腺素H2(prostaglandin H2,
PGH2)。
      有兩種常見(jiàn)的COX，一種是組成性表達(dá)的COX-1，另一種是誘導(dǎo)性表達(dá)的COX-2。哺乳動(dòng)物的COX-1與COX-2的分子量相似，分別是70和72KDa，其氨基酸序列有65%同源，其中酶催化活性區(qū)域的氨基酸序列幾乎*。COX-1在很多組織中組成性表達(dá)，在胃粘膜、腎臟等中高表達(dá)，催化產(chǎn)生維持正常生理功能的前列腺素，從而參與血管舒縮、血小板聚集、胃粘膜血流、胃黏液分泌及腎臟功能等的調(diào)節(jié)。COX-2在正常生理狀態(tài)下幾乎不表達(dá)或表達(dá)很少，僅在腦、腎臟和生殖器官等中有一定水平的組成性表達(dá)。COX-2在巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和單核細(xì)胞等發(fā)生炎癥反應(yīng)時(shí)，可以被誘導(dǎo)表達(dá)。例如受炎性刺激物、損傷、有絲分裂原或致癌物質(zhì)等促炎介質(zhì)誘導(dǎo)后，COX-2的表達(dá)增高，從而參與多種病理生理過(guò)程。COX-3是COX-1的不同剪接體，和COX-1相比，COX-3多保留了一個(gè)內(nèi)含子，在狗(dog)中該內(nèi)含子的長(zhǎng)度為93個(gè)堿基，而在人和小鼠中長(zhǎng)度為94個(gè)堿基，因此在狗中COX-3是有酶活性的，而人和小鼠中的COX-3由于移碼突變而沒(méi)有酶活性。
      環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑篩選試劑盒COX-2與炎癥和腫瘤等的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此，COX-2的選擇性抑制劑成為藥物研究的一個(gè)熱點(diǎn)。1991年1月*個(gè)真正意義上的COX-2選擇性抑制劑塞來(lái)昔布(Celecoxib)經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，同年5月第二個(gè)選擇性抑制劑羅非昔布(Rofecoxib)也在歐洲上市。這些COX-2抑制劑藥物成功上市，為后續(xù)COX-2選擇性抑制劑的研究和發(fā)展開(kāi)辟了廣闊道路。如今在臨床上COX-2選擇性抑制劑已經(jīng)被廣泛用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牙痛、手術(shù)后疼痛以及腫瘤等疾病。
      本試劑盒的檢測(cè)的基本原理參考圖1。在輔助因子(Cofactor)存在的情況下，COX-2使用其環(huán)氧化酶(COX)活性把花生四烯酸(Arachidonic Acid)等底物環(huán)氧化生成PGG2等中間產(chǎn)物，繼而COX-2使用其過(guò)氧化物酶(peroxidase)活性把PGG2等中間產(chǎn)物催化生成PGH2等zui終產(chǎn)物，同時(shí)把幾乎沒(méi)有熒光的COX-2探針(Probe)催化生成有強(qiáng)熒光的探針(Ex560/Em590)。這樣通過(guò)熒光檢測(cè)就可以非常靈敏地檢測(cè)COX-2的酶活性。如果在反應(yīng)中加入COX-2抑制劑(Inhibitor)，熒光的生成就會(huì)被抑制，熒光強(qiáng)度與抑制劑的抑制效果成反比，這樣就可以檢測(cè)出抑制劑的抑制效果。本反應(yīng)生成的強(qiáng)熒光探針的zui大激發(fā)波長(zhǎng)為571nm，zui大發(fā)射波長(zhǎng)為585nm，推薦檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)為560nm ，發(fā)射波長(zhǎng)為590nm。

圖1. 本試劑盒篩選COX-2抑制劑的原理圖。Probe*表示催化生成的強(qiáng)熒光探針。
      環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑篩選試劑盒中提供了人重組COX-2(recombinant human COX-2, rhCOX-2)、底物(Substrate)、輔助因子(Cofactor)、陽(yáng)性對(duì)照COX-2抑制劑(Celecoxib)及可以被COX-2催化產(chǎn)生熒光的熒光探針(Probe)，并且對(duì)COX-2和底物的使用量進(jìn)行了優(yōu)化。不僅能檢測(cè)出IC50很低的抑制劑，也能檢測(cè)出IC50較高的抑制劑。
      用于96孔板檢測(cè)時(shí)，一個(gè)包裝的本試劑盒可以進(jìn)行100次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)    產(chǎn)品名稱(chēng)    包裝
S0168-1    COX-2 Assay Buffer    30ml
S0168-2    COX-2 Probe    600μl
S0168-3    COX-2 Cofactor (50X)    20μl
S0168-4    COX-2 Substrate (50X)    20μl
S0168-5    Substrate Buffer    100μl
S0168-6    rhCOX-2 (25X)    22μl
S0168-7    Celecoxib (100μM)    20μl
—    說(shuō)明書(shū)    1份
保存條件：
      -20℃保存，半年有效。S0168-2 COX-2 Probe和S0168-3 COX-2 Cofactor (50X)需避光保存。
注意事項(xiàng)：
      COX-2 Probe在空氣中不太穩(wěn)定，開(kāi)啟后應(yīng)盡快使用，且在使用過(guò)程中要注意適當(dāng)避光。
      COX-2 Probe的反應(yīng)產(chǎn)物在還原劑的存在下會(huì)很不穩(wěn)定，樣品中帶入到zui終反應(yīng)體系中的二硫蘇糖醇(DTT)或者β-巰基乙醇的濃度須低于10μM。
      請(qǐng)確保樣品的pH值在7-8之間，或者確保加入樣品后反應(yīng)體系的pH值在7-8之間，否則會(huì)影響COX-2 Probe的穩(wěn)定性和熒光值。
      COX-2 Probe和COX-2 Assay Buffer需要*解凍并回復(fù)至室溫后再使用，否則會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。rhCOX-2使用時(shí)應(yīng)在冰上進(jìn)行。使用完畢后各試劑應(yīng)立即按照試劑盒要求的條件保存。
      COX-2 Substrate容易被氧化，請(qǐng)盡量避免長(zhǎng)時(shí)間與空氣接觸。且在使用和儲(chǔ)存過(guò)程中請(qǐng)注意保持低溫，否則其穩(wěn)定性可能會(huì)受到影響。
      待測(cè)抑制劑的溶劑可能會(huì)對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生干擾，如無(wú)水乙醇和70%乙醇。推薦以COX-2 Assay Buffer、Milli-Q級(jí)純水、DMSO為溶劑配制、稀釋待測(cè)抑制劑，并在對(duì)照孔中添加與抑制劑等體積的溶劑以排除干擾。
      COX-2 Cofactor、COX-2 Substrate、rhCOX-2等試劑的量均比較少，在使用前請(qǐng)先適當(dāng)離心，然后適當(dāng)混勻后再使用。
      Substrate Buffer有腐蝕性，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或腐蝕其他物品；Celecoxib對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
      環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑篩選試劑盒僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。