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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 19810ES03 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業(yè) |
產品介紹
伴刀豆球蛋白A磁珠是表面共價偶聯了伴刀豆球蛋白 A（ConA）的超順磁性聚合物微球，具有單分散和磁反應性強等特點。ConA磁珠在Ca2+和Mg2+存在的情況下，通過伴刀豆球蛋白 A與末端α-D-甘露糖基和α-D-葡萄糖基的親和作用，快速高效地分離純化多糖、糖蛋白和糖脂等生物分子，而且使用ConA磁珠分離或固定細胞非常便捷，并在后續(xù)清洗過程中大程度減少細胞丟失，也可以用于收集和固定細胞核，也可以直接用于CUT & Run和CUT & Tag（ChIP-seq實驗的革新性技術）等實驗。
產品性質
基質 | 磁性聚合物微球 |
配體 | 伴刀豆球蛋白 A（Con A） |
載量 | 105個細胞/μL磁珠 |
粒徑 | 1 μm |
磁珠濃度 | 10 mg/mL |
應用 | 分離細胞/細胞核，純化糖蛋白，Cut-Run, Cut-Tag |
儲存緩沖液 | PBS (pH7.4), 0.01% Tween-20, 0.05% Proclin-300 |
儲存條件
2~8℃保存，有效期2年。
使用說明
以捕獲細胞和純化糖蛋白為例，用于Cut-Tag具體操作見12598ES試劑盒。
緩沖液配置
1）自備試劑
試劑名稱 | 組分 |
結合液 | 20 mM HEPES (pH7.5), 10 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2 |
清洗液 | 20 mM HEPES (pH7.5), 150 mM NaCl, 0.5 mM Spermidine, 1×Protease inhibitors cocktail |
洗脫液 | 5mM Tris (pH8.0), 150 mM NaCl, 1M Glucose |
2）自備設備和耗材：磁性分離架，旋轉混合儀，PCR管，微量移液器及吸頭（RNase-free）。
3）將磁珠恢復至室溫，且均勻重懸。
樣品準備（以哺乳動物細胞為例）
1）準備哺乳動物細胞(1.0×104~1.0×105個)，離心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸棄上清；
2）加入 140 μL 結合緩沖液 ，充分混勻重懸細胞，離心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸棄上清；
3）加入 90 μL 結合緩沖液，充分混勻重懸細胞。
【注】：貼壁較緊的細胞可使用 等部分消化獲得，對于動物組織、植物或真菌細胞可通過特殊處理獲得分散的細胞或原生質體進行實驗。
磁珠準備
1）吸取10 μL均勻重懸的 Con A磁珠，加入40 μL 磁珠結合液，吹吸混合，磁吸棄上清。
2）加入10 μL 磁珠結合液，吹吸混合。
細胞捕獲
1）將重懸在結合液中的ConA磁珠（步驟3）輕輕滴加在細胞懸液（步驟2）中，顛倒5次混勻后，置于旋轉儀上混勻，室溫孵育30 min 或者4 ℃過夜。
2）離心管在磁力架上放置1 min，吸棄上清。
3）取500ul清洗液加入磁珠中，用移液器輕柔吹打，重懸磁珠，再置于磁力架1 min，吸棄上清。
4）重復步驟3）洗滌3-4次。
洗脫
1）糖蛋白的洗脫：加入50~250 μL洗脫液，置于翻轉混合儀上室溫孵育10~30 min，接著在磁力架上靜置 1 min，收集上清得到糖蛋白，可用于SDS-PAGE電泳或Western檢測
【注】：也可使用PNGase F酶切除糖基進行洗脫。
2）細胞的洗脫：磁珠粒徑小，對細胞的生長和活性影響較小，也可以選擇不洗脫。
注意事項
1. 磁珠應避冷凍，否則可能會導致磁珠碎裂，性能下降。
2. 磁珠取用前應恢復至室溫，且充分混勻；但不要劇烈震蕩，否則容易產生氣泡。
3. 建議樣本細胞活性不低于80% (細胞活性可以用臺盼藍染色來鑒定)。
4. ConA在Ca2+和Mn2+離子存在時才有活性，實驗中應用的溶液不能含有EDTA等螯合劑，否則會導致結合效率降低。
5. 水平旋轉時定時輕彈底部混勻，細胞量較多時易聚集干結。
6. 槍頭吸吹時要緩慢，避免產生過多氣泡；避免用10 μL小槍頭吹吸細胞；
7. 吸除管內液體時，槍頭遠離磁珠一端，避免槍頭粘連帶出磁珠。
8. 針對特定細胞類型和細胞量，可能需要增減磁珠用量以達到優(yōu)效果。
9. 本產品僅作科研用途！
10. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
