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標簽： 生物素 ?；?探針
在標準的切口平移實驗體系中，生物素-11-dNTP取代了dNTP，DNA酶I 的濃度調(diào)整到可生成長100~500個核苷酸的范圍，其他生物素?；暮塑账嵋部纱嫔锼?11-dNTP。
實驗方法
- 切口平移法
- 隨即寡核苷酸引物合成法
| 實驗材料 | DNA |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | DNA聚合酶 dNTP 2-疏基乙醇 生物素 NaCl EDTA SDS 無水乙醇 |
| 儀器、耗材 | 注射器 電泳儀 離心機 培養(yǎng)箱 |
| 實驗步驟 | 1. 混合以下物質(zhì)于100 μl 反應體積：
3. 加樣于瓊脂糖凝膠，同時帶對照分子量標準，在15 V/cm 電壓降下電泳。
4. 消化的DNA大小介于100~500 bp 之間，接步驟5繼續(xù)，若大小在500~1 000核苷酸之間（或更大）加入第二份DNA酶Ⅰ繼續(xù)溫育。
5. 加入2 μl，0.5 mol/l pH8.0的EDTA和1 μl 10%SDS，68℃加熱10 min 終止反應和滅活DNA酶Ⅰ。
6. 在1 ml 注射器中準備如Sephadex G-50離心柱，用2 ml 無水乙醇清洗注射器和硅化的玻璃棉。
9. 用比色法估計生物素?；磻某潭群吞结樀馁|(zhì)量或進行化學發(fā)光檢測。 |
