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突變是指在PCR過(guò)程中通過(guò)堿基改變而引起蛋白質(zhì)氨基酸的改變。 定點(diǎn)突變：在DNA片段的特定位點(diǎn)引入堿基改變，或者片段的插入以及刪除。 | ||||||||||||||||||||||||||||
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| 1、可突變?nèi)魏蝸?lái)源于 dam+陽(yáng)性菌株的質(zhì)粒 2、非PCR線性反應(yīng)，可減少不需要的錯(cuò)誤 3、點(diǎn)突變，缺失突變，插入突變 4、突變擴(kuò)增4-14 kb大小， 具有 > 85% 突變效率 5、突變< 1 hr ，加上 overnight 轉(zhuǎn)化 | ||||||||||||||||||||||||||||
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| 1、Agilent* 2、非PCR 線性反應(yīng)減少不需要的錯(cuò)誤 3、可突變?nèi)魏蝸?lái)源于 dam+陽(yáng)性的菌株 4、約 2 hr 加上 overnight 轉(zhuǎn)化 5、優(yōu)化后可突變< 8 kb的質(zhì)粒 6、每個(gè)反應(yīng)可進(jìn)行1-5 點(diǎn)突變 7、每個(gè)突變點(diǎn)僅需一條突變引物 8、突變效率擴(kuò)增出一條封閉的單鏈 Agilent部分定點(diǎn)和多點(diǎn)突變?cè)噭┖辛斜恚?/p>
隨機(jī)突變是指目的基因發(fā)生突變的部位是隨機(jī)的, 如PCR克隆基因時(shí), 往往產(chǎn)生不確定序列的突變。在Tag酶的作用下, 有時(shí)在遇到模板中的A-T對(duì)時(shí), 傾向于摻入G-C對(duì), 而使基因序列發(fā)生改變。隨機(jī)突變常用于鑒定克隆的DNA中特定功能在基因序列中所處的位置及其與周圍序列的關(guān)系。如果對(duì)所克隆的DNA特定序列所編碼的產(chǎn)物及其功能知之甚少，可采用隨機(jī)突變法進(jìn)行研究，以確定功能區(qū)域有助于縮小研究范圍。 | ||||||||||||||||||||||||||||
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