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中性粒細(xì)胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)的功能包括粘附、移動(dòng)、吞噬殺菌等,是機(jī)體天然免疫力的重要組成部分。
試劑及材料
1. 白色葡萄球菌
2. 肉湯培養(yǎng)基
3. 鹼性美藍(lán)液
操作方法
1. 菌液的制備 將白色葡萄球菌接種于中,放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)12h左右;置水浴中加熱100℃ 10min殺死細(xì)菌,用無菌生理鹽水稀釋成6×108 細(xì)菌/ml備用;
2. 用血紅蛋白吸管吸取受試者耳垂或指血40μl,立即加入盛有20μl肝素(濃度為20U/ml)的潔凈凹玻片的凹孔內(nèi),輕輕攪動(dòng)混勻, 再加上述葡萄球菌菌液20μl充分混勻。然后置入鋪有濕紗布的有蓋容器內(nèi)(此容器先放37℃溫箱中預(yù)溫),在37℃溫箱中作用30min,其間每隔10min搖勻一次;
3. 作用完畢,取1小滴混合液置于潔凈無油污的載玻片一端,推成薄片。待干后,用甲醇固定4~5min,鹼性美藍(lán)液染2~3min,置油鏡下觀察。隨機(jī)計(jì)數(shù)100個(gè)中性粒細(xì)胞,分別記錄發(fā)生吞噬和未吞噬的白細(xì)胞數(shù),對(duì)有吞噬作用的白細(xì)胞,應(yīng)同時(shí)記錄所吞噬的細(xì)菌數(shù);
結(jié)果分析
吞噬細(xì)胞%=即100個(gè)中性粒細(xì)胞中吞噬有細(xì)菌的細(xì)胞數(shù);
吞噬指數(shù)=將100個(gè)中性粒細(xì)胞所吞噬的細(xì)菌總數(shù)除以100,得到每個(gè)白細(xì)胞吞噬細(xì)菌的平均數(shù),即為吞噬指數(shù)。