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很多膜可作為蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移的固相支持物，如重氮化纖維素膜（DPT，DBM）、DEAE-纖維素膜、尼龍膜等，但用的zui多的還是硝酸纖維素膜（NC膜），該膜與蛋白質(zhì)以非共價(jià)的疏水作用形式結(jié)合，結(jié)合能力約為80 μg/cm2。
實(shí)驗(yàn)方法
- 基本方案
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 蛋白質(zhì) |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | 轉(zhuǎn)移緩沖液 甲醇 電極緩沖液 |
| 儀器、耗材 | 電轉(zhuǎn)移槽 電泳儀 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 1. 剪6塊3 MM 濾紙和一塊NC膜。 2. 將剪好的3 MM 濾紙和NC膜在轉(zhuǎn)移緩沖液中浸泡3-5分鐘。 3. 按下列過程安裝轉(zhuǎn)移裝置，將塑料支架平放在含轉(zhuǎn)移緩沖液的托盤中，在塑料支架上放一塊海綿。 4. 將3塊3MM濾紙對齊放在海綿上，然后依次將NC膜、凝膠、及另3塊慮紙和海綿放上。 5. 用塑料支架夾緊上述各層，放入電轉(zhuǎn)移槽內(nèi)，NC膜一側(cè)向正極，凝膠一面向負(fù)極。 6. 接通電源電壓120 mA，轉(zhuǎn)移6小時(shí)以上或夜。 7. 轉(zhuǎn)移結(jié)束后，取出塑料支架，依次取掉各層，用鉛筆在膜的上沿作好標(biāo)記，切下其中一個(gè)孔所對應(yīng)膜的一半，用氨基黑或考馬士亮蘭染色，檢查轉(zhuǎn)移效果。 8. 將其余的NC膜放在一張干凈的3 MM 濾紙上，室溫干燥30~60分鐘（可不做）。 |
| 注意事項(xiàng) | 1. 慮紙及膜的大小不應(yīng)大于待轉(zhuǎn)移膠的大小，否則在轉(zhuǎn)移過程中會發(fā)生短路，影響轉(zhuǎn)移效果。 2. 操作中應(yīng)戴手套，切不可用手直接觸摸，因手上的汗和分泌物將直接影響到蛋白從膠向膜的轉(zhuǎn)移。 3. 放置NC膜和濾紙時(shí)，每層之間不應(yīng)有氣泡，否則將影響轉(zhuǎn)移效果。 4. 待轉(zhuǎn)移蛋白分子量決定轉(zhuǎn)移時(shí)間，分子量大，轉(zhuǎn)移時(shí)間長，反之則小。 5. 干燥雖然可使蛋白質(zhì)更牢固地結(jié)合到膜上，但也可能加劇蛋白 |
