有關(guān)色譜柱的內(nèi)容，分為發(fā)展現(xiàn)狀、構(gòu)成、分類、正確使用、維護(hù)、老化和再生幾個(gè)部分。

一 色譜柱的發(fā)展現(xiàn)狀

高效液相色譜(HPLC)是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離測定的重要手段。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析。

•色譜柱是高效液相色譜的心臟，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性，延長柱子的使用壽命非常重要。盡管經(jīng)過數(shù)十年的發(fā)展,出現(xiàn)了各種各樣的色譜柱，如制備柱、分析柱和各種微型柱，但色譜柱主體上仍由柱體、柱內(nèi)填料和兩端的接頭組成。由于使用了高效填料，并不需要很長的柱長，常規(guī)分析柱多為15~30 cm的直型柱。由于高效液相色譜柱要承受系統(tǒng)高壓,所以柱體一般選用金屬材質(zhì)。大部分色譜柱的接頭為通用尺寸，可互換使用。

二 色譜柱的構(gòu)成

•色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成，壓力不高于70kkg/cm2時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度 。

•色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板，是燒結(jié)不銹鋼或欽合金，孔徑0.2一20µm(5一10µm)，取決于填料粒度，目的是防止填料漏出。

三 色譜柱的分類

•通常使用填充柱和毛細(xì)管柱兩類。

兩類柱子的區(qū)別

填充柱（銅&不銹鋼材料）   （玻璃材料）

毛細(xì)管柱

色譜柱按用途可分為分析型和制備型。

常用的色譜柱及其尺寸：

•(1)常規(guī)分析柱(常量柱)，內(nèi)徑2—smm(常用4.6mm，國內(nèi)有4mm和5mm)，柱長10—30cm；

•(2)窄徑柱，又稱細(xì)管徑柱、半微柱，內(nèi)徑1—2mm，柱長10—20cm；

•(3)毛細(xì)管柱(又稱微柱)，內(nèi)徑0.2—0.5mm；

•(4)半制備柱，內(nèi)徑>5mm；

•(5)實(shí)驗(yàn)室制備柱，內(nèi)徑20—40mm,柱長10—30cm；

•(6)生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達(dá)幾十厘米。柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長、填料粒徑和折合流速來確定，目的是為了避免管壁效應(yīng)。

四 色譜柱的正確使用

•加裝保護(hù)柱：保護(hù)柱屬消耗品，經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析(50~100次)后，出現(xiàn)柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時(shí)，應(yīng)考慮更換保護(hù)柱。

•過濾流動(dòng)相和樣品 ：流動(dòng)相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成，原則上，所有經(jīng)過色譜柱的流動(dòng)相均應(yīng)過濾，但在實(shí)際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別 。

•凈化樣品 ：樣品中含有對色譜柱有損害的化學(xué)成分，如產(chǎn)生吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機(jī)分子和強(qiáng)吸附性物質(zhì),以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團(tuán)離子。在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。

•避免過高的柱壓 ：避免的方法為(1)柱壓過高時(shí)，盡可能采用較小的流速，以不超過柱允許壓力的一半為宜。(2)當(dāng)流速較大時(shí)，應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。(3)使用手動(dòng)進(jìn)樣閥時(shí)，進(jìn)樣閥的切換要盡可能的快。 

•注意溫度和酸堿度 ：一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱使用溫度不超過60℃，以低于40℃為宜，特別是在流動(dòng)相pH接近使用限度時(shí)，更應(yīng)降低使用溫度。目前的鍵合硅膠色譜柱標(biāo)示的pH適用范圍可達(dá)2~10，但在實(shí)際使用時(shí)應(yīng)避免的pH條件，特別是在偏堿性的條件(pH≥8)下使用。如必須要在的pH條件下使用時(shí)，可通過以下方法避免柱損害：(1)在泵和進(jìn)樣閥之間加裝預(yù)柱(飽和柱)來飽和流動(dòng)相；(2)降低使用溫度；(3)檢驗(yàn)完畢后立即用與所使用的流動(dòng)相互相混溶的“溫和溶劑”*清洗。

•正確及時(shí)的沖洗：始試驗(yàn)前，了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。對于新色譜柱，如無特殊說明均為評價(jià)報(bào)告中所用流動(dòng)相。柱中當(dāng)前溶劑一定要與分析樣品所用流動(dòng)相互溶，如不能混溶，要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。異丙醇是能與各種溶劑混溶的試劑，可作為中介流動(dòng)相使用。對于含有緩沖鹽的流動(dòng)相，好的辦法是先用與分析用流動(dòng)相組成*相同但不含緩沖鹽的溶液進(jìn)行沖洗，再逐步過渡到純甲醇沖洗。 

五 色譜柱的維護(hù)

•柱的安裝與拆卸 ：色譜柱屬易耗品,需要不斷更換

•柱污染的處理 ：常見的柱污染有柱頭燒結(jié)濾板堵塞、柱頭內(nèi)填料污染和柱內(nèi)有鹽結(jié)晶析出。

•柱的貯存與管理 ：色譜柱長期不用時(shí),應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚砗蟊４妗?nbsp;

六 色譜柱的老化

•目的：除去溶劑、水分、以及色譜柱制備過程中其他揮發(fā)性雜質(zhì)；促進(jìn)固定液均勻牢固的分布在擔(dān)體上。

•老化溫度的選擇應(yīng)注意：足夠高以除去不揮發(fā)物質(zhì)；足夠低以延長柱壽命和減少柱流失；溫度越低老化時(shí)間應(yīng)越長；不超過色譜柱的上限使用溫度

•填充柱比毛細(xì)管柱應(yīng)更經(jīng)常、更嚴(yán)格的老化

•填充柱老化時(shí)間應(yīng)長些，可過夜；毛細(xì)管柱老化只能是輕度的，時(shí)間應(yīng)短些，防止固定液流失。

•老化好的色譜柱若不立即投入使用，應(yīng)將其從柱箱中取出，兩端蓋上帽子，防止空氣、水分或其他雜質(zhì)的進(jìn)入。

七 色譜柱的再生

•反相柱的再生。采用以甲醇:水=95:5(V/V)，純甲醇，二氯甲烷等溶劑作流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱的量為20一30倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。

•正相柱再生。順次以正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作流動(dòng)相沖洗色譜柱每步注意平衡溶劑的順序，不要顛倒每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱的量為20—30倍柱體積(因異丙醇的粘度較大，沖洗過程中請隨時(shí)注意調(diào)整沖洗的流速)，用甲醇沖洗完后，再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必需嚴(yán)格脫水。 

•離子交換柱的再生。長時(shí)間在高pH值和高離子強(qiáng)度緩沖溶液中使用，將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力降低。用稀酸緩沖溶液沖洗，可使陽離子柱再生;反之，用稀堿緩沖溶液沖洗，可使陰離子柱再生。