問：我的色譜柱大概只進(jìn)了100次左右樣品。然后，峰型開始變差，理論塔板數(shù)也變得很低。這是什么原因呢？

答：100次確實(shí)是非常短。在正常情況下，我們都希望色譜柱能使用更長久。為了確認(rèn)是什么問題，我們需要先確定是否是你的方法導(dǎo)致了色譜柱壽命變短。

有兩種情況：

1. 用于相同測試的之前的色譜柱是否可以使用更長時(shí)間。

2. 是否所有用于該方法的色譜柱，在運(yùn)行大約相同針數(shù)時(shí)，都出現(xiàn)了相同問題。

在di一種情況下，應(yīng)確保測試的所有條件都是一致的。樣品組分是否發(fā)生了變化？樣品中有強(qiáng)烈吸附污染物破壞了色譜柱性能。儀器流路中的密封件是否完好？脫落的密封件是否會(huì)堵塞色譜柱的過濾器和頂層填料，從而影響樣品的分布。

如果能夠合理的確保色譜條件沒有發(fā)生任何變化，則可以保守的認(rèn)為原因來源于填充床的物理損壞。包括在實(shí)驗(yàn)室或者運(yùn)輸過程中對(duì)色譜柱的粗暴處理（是否掉落？）或者是制造時(shí)產(chǎn)生的缺陷。此類缺陷無法通過標(biāo)準(zhǔn)色譜柱質(zhì)量控制檢測到，只有在使用后才能夠顯現(xiàn)出來。這種情況，色譜柱生產(chǎn)商將免費(fèi)更換色譜柱。

問：這些制造商很好，但這不是我的問題。我的色譜柱總是只能使用很短的時(shí)間。有時(shí)是100次進(jìn)樣，有時(shí)是200次。我可以接收200次的進(jìn)樣，但只有100次真的是太少了?；ㄙM(fèi)太昂貴。我需要怎么做？

答：我*同意你的看法。我們一起要做的就是找到問題的原因，然后看看我們可以采取什么措施。

造成問題的可能原因是樣品成分吸附在色譜柱的頂部?？赡苡捎谒麄冊诹鲃?dòng)相中的溶解度低而沉淀，或者可能被強(qiáng)烈吸附。隨著注入越來越多的樣品，這些污染物會(huì)積聚在色譜柱的頂部，從而阻止樣品合理的吸附和分布。這導(dǎo)致峰型變差。通常，這個(gè)問題伴隨著背壓的增加。

問：好的，可能就是這樣。那么我該如何解決這個(gè)問題？

答：有幾種方法可以防止這種情況的發(fā)生。一種是使用合適的樣品制備技術(shù)來凈化樣品。使用具有類似化學(xué)性質(zhì)的SPE柱為分離柱進(jìn)行固相萃取可以很好地解決此問題。

另一種更好的方法是使用保護(hù)柱。預(yù)柱可以作為分析柱的頂部，在出現(xiàn)問題時(shí)將其替換。為了獲得好的性能，使用的保護(hù)柱應(yīng)與分析柱具有*相同的填料，并以與分析柱相同的高性能填料技術(shù)進(jìn)行填料。如果使用由不同品牌的填料制成的預(yù)柱，則在分離能力和保護(hù)分析柱方面都無法獲得好的性能。另外，請(qǐng)勿使用較大的粒徑。較大的顆粒或填充不好的預(yù)柱會(huì)導(dǎo)致譜帶展寬，分離效果下降。

問：使用保護(hù)柱聽起來不錯(cuò)。還有其他解決方案嗎？

答：嗯，是的。還有其他幾種可能性，但是它們都有缺點(diǎn)。

我不是提倡使用可能會(huì)溶解色譜柱頂部污染物的溶劑進(jìn)行“沖洗”的方法。在許多情況下，此過程根本行不通。例如，如果沉淀在柱頂上的污染物是蛋白質(zhì)，那么當(dāng)您嘗試將其沖洗時(shí)，由于變性甚至交聯(lián)，因此可能無法再次溶解它們。此外，每次沖洗也將會(huì)移除水解鍵合相，否則該鍵合相在發(fā)生水解的位置處保持局部平衡。因此，重復(fù)沖洗實(shí)際上可以導(dǎo)致色譜柱加速老化。同樣在沖洗后，必須用流動(dòng)相重新平衡色譜柱，在某些情況下（如離子對(duì)色譜）可能會(huì)花費(fèi)大量時(shí)間。

另一種經(jīng)常嘗試的方法是反沖洗。如果你用的溶劑不同于流動(dòng)相，那么同樣的反對(duì)理由也適用于色譜柱清洗。如果你只使用流動(dòng)相，則需要很長的時(shí)間將污染物出去或可能根本不起作用。而且，任何反沖洗都會(huì)削弱色譜柱的性能。雖然現(xiàn)在的色譜柱填裝的都很好，可以承受反沖洗，但我還是要重申，這不是一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)做法。

問：所以，建議是使用預(yù)柱？

答：是的。它們的價(jià)格不貴-視品牌和類型而定，在10到50美元之間-并且它們保護(hù)的色譜柱通常成本是其十倍左右。此外，它還可以保護(hù)色譜柱免受其他更難追蹤來源的污染物的侵害。你的色譜柱問題的根源可能是例如流動(dòng)相中的灰塵或泵密封墊脫落造成的碎屑導(dǎo)致。也可能是流動(dòng)相中污染物的吸附。其中一些可能很難解決，但是預(yù)柱能夠更好的解決這些問題。

問：還有其他導(dǎo)致色譜柱壽命縮短的原因嗎？

答：是的，但是如果您聽從制造商的建議，則不太可能。

一種可能是由于流動(dòng)相pH值超出建議范圍而導(dǎo)致色譜柱塌陷。這也可能是由于樣品溶解在強(qiáng)酸或堿性溶液中引起的。

此外，還有一些色譜柱用于特定的項(xiàng)目。

例如氨基柱與醛和酮會(huì)發(fā)生反應(yīng)。在無緩沖的水溶液中的氨基柱會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)堿性，導(dǎo)致部分硅膠溶解。

如果使用了錯(cuò)誤的溶劑，色譜柱也會(huì)塌陷。原因是色譜柱從根本上說是非常松散的結(jié)構(gòu)。它們通過顆粒彼此的粘附而部分地保持在一起。當(dāng)將其置于能夠破壞這種粘附力的流動(dòng)相中時(shí)，塌陷的可能性就會(huì)增加。這偶爾會(huì)發(fā)生在中等極性溶劑中的氰基柱或THF中的苯基柱。

另一個(gè)原因遠(yuǎn)離色譜柱“清洗”。 

小 結(jié)

導(dǎo)致色譜柱壽命短的原因，可能樣品原因，物理損壞以及不合理的使用：

如果是樣品原因可對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，或者使用預(yù)柱（*），另外也可以清洗和反沖洗（不推薦）。

物理損壞是不可逆的，需要更換色譜柱。

不合理的使用包括超出pH使用范圍，使用錯(cuò)誤的溶劑，以及部分色譜柱只能用于特定項(xiàng)目。