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當前位置:上海達為科生物科技有限公司>>實驗>>細胞實驗>> 腫瘤細胞侵襲
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所 在 地上海市
更新時間:2022-12-23 09:47:31瀏覽次數(shù):766次
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Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分,含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖,鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上,能在DMEM培養(yǎng)基中重建形成膜結構,這種膜結構與天然基質(zhì)膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8um,而且膜孔都被Matrigel覆蓋,細胞不能自由穿過,必須分泌水解酶,并通過變形運動才能穿過這種鋪有Martrigel 的濾膜,這與體內(nèi)情況較為相似。鋪有Martrigel的濾膜放在以Blind Well腔或MICS腔上下室之間,鋪有Martrigel面朝向上室,在下室中加有趨化劑,上室加入重懸的瘤細胞,具有侵襲能力的細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動。細胞穿膜所用的時間與Martrigel的用量有關,選擇 25ugMartrigell鋪膜,16小時后觀察結果較為合適。穿過濾膜的細胞多數(shù)粘附在濾膜下表面,可用棉簽將上表面的細胞拭去,然后用乙醇固定濾膜,PE染色,在光鏡下觀察統(tǒng)計穿過Martrigel的細胞數(shù)。另外用Transwell小室也可進行重建基質(zhì)膜侵襲分析,這一方法是在 Transwell小室吊籃式上腔的濾膜上鋪上30ugMartrigel,加入細胞72h后觀察結果。值得注意的是,細胞在Transwell腔中培養(yǎng) 72小時后,有相當數(shù)量穿過濾膜的細胞不再粘附在濾膜下表面,而是脫落進人下腔溶液中.因此統(tǒng)計穿過基質(zhì)膜的細胞數(shù)目時應把這部分細胞考慮在內(nèi)。腫瘤細胞穿過重建基質(zhì)膜的能力與它的體內(nèi)侵襲轉移能力表現(xiàn)出較好的相關性,可以用重建基質(zhì)膜模型初篩抗侵襲藥物。
腫瘤細胞侵襲實驗(Tumour InvasionAssay)可以:(1)研究各種細胞因子對惡性腫瘤細胞侵襲和轉移的影響;(2)一些抑制血管生成的新藥研究;(3)研究腫瘤細胞侵襲和轉移機制。
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