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特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品（foods for special medical purpose, FSMP），簡稱特醫(yī)食品。我國特醫(yī)食品行業(yè)由于起步較晚，目前規(guī)模相對較小，但是近年來呈現(xiàn)出良好的發(fā)展態(tài)勢，截至2024年7月1日，共有192款特醫(yī)食品獲批，第一季度與第二季度分別新增特醫(yī)食品17款與11款。食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品通則中明確規(guī)定多種維生素含量。其中維生素A和D是人體生長發(fā)育的必需物質(zhì)，尤其對胎兒、嬰幼兒的發(fā)育，上皮組織的完整性，視力，生殖器官，血鈣和磷的恒定，骨骼、牙的生長發(fā)育有重要作用。維生素E是一種優(yōu)良的天然抗氧化劑，能抑制不飽和脂肪酸的氧化，減少過氧化脂質(zhì)的形成以及對機(jī)體生物膜的損害，有抗衰老、抗癌及防止動(dòng)脈粥樣硬化作用 [1]。

目前有關(guān)配方食品中，維生素 ADE 的測定方法較多，其中操 作步驟中對于脂溶性維生素基本都要經(jīng)過皂化、提取、洗滌、 濃縮等復(fù)雜的前處理步驟，并且無法實(shí)現(xiàn)一個(gè)方法完成以上幾 種維生素的同時(shí)測定。賽默飛液相團(tuán)隊(duì)從 2010 年開始嘗試?yán)?用特色的雙三元液相系統(tǒng)，結(jié)合二維色譜實(shí)現(xiàn)維生素 A、維生素 D2、D3 以及維生素 E 四種同分異構(gòu)體的同時(shí)測定，前后共推出六代方法對該方案進(jìn)行不斷優(yōu)化。本文在先前研究的[2]基礎(chǔ)上，通過優(yōu)化模塊配置、流動(dòng)相組成、色譜柱型號、方法梯度等，提高了方法穩(wěn)定性以及幾種維生素的分離度，并在二維色譜的基礎(chǔ)上，通過增加在線固相萃取的設(shè)定，將傳統(tǒng)的人工液液萃取、洗滌和干燥濃縮等步驟同時(shí)轉(zhuǎn)移到儀器自動(dòng)完成， 大大簡化了前處理過程，減少有機(jī)溶劑的使用以及與實(shí)驗(yàn)人員的接觸，使整個(gè)實(shí)驗(yàn)更加環(huán)保，大大降低實(shí)驗(yàn)成本的同時(shí)也提高了實(shí)驗(yàn)的安全性。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器：ThermoFisher Vanquish Core 高效液相色譜儀 SPE 泵：Vanquish Quaternary Pump （VC-P20-A-01） 一維、二維泵：Vanquish Dual Pump (VC-P33-A-01) 自動(dòng)進(jìn)樣器：Vanquish sampler CT （VC-A12-A-02, 100μL 定 量環(huán)） 柱溫箱：Vanquish Column Compartment C（VC-C10-A-03， 含兩個(gè) 2p-6p 切換閥） 檢測器：Variable Wavelength Detector C（VC-D40-A-01, 含11μL流通池） Vanquish Diode Array Detector HL （VH-D10-A, 含 60mm 流通池）

色譜軟件：Chromeleon Chromatography Data System7.3.1

樣品前處理及標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備：參考AN_24019_HPLC 在線固相萃取聯(lián)用二維液相色譜測定食品中維生素 A、D、E及異構(gòu)體含量

在線固相萃取-二維液相色譜法測定

在線固相萃取-二維液相色譜（Online SPE-2D-LC）系統(tǒng)連接見圖1所示

（1D, 第一維; 2D, 第二維; SPE, 在線固相萃取柱;  Trap, 捕集柱）

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論：

對照品和樣品溶液譜圖

維生素A、維生素E四個(gè)同分異構(gòu)體和維生素D2、維生素D3對照品和樣品溶液一維和二維分析譜圖見圖2-a、b、c。

圖2a  維生素A對照品及樣品一維325 nm譜圖（上圖為對照品，下圖為樣品）（點(diǎn)擊查看大圖）

圖2b  維生素E對照品及樣品一維294 nm譜圖（上圖為樣品，下圖為對照品）（點(diǎn)擊查看大圖）

圖2c  維生素D對照品及樣品一維 264 nm譜圖（上圖為對照品，下圖為樣品）（點(diǎn)擊查看大圖）

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線性及靈敏度

按照表1標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度配置溶液，分別進(jìn)樣100μ­L，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，考察方法的線性范圍及定量限。結(jié)果顯示，各維生素在其濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均＞0.999。方法靈敏度較高，滿足標(biāo)準(zhǔn)要求，方法線性及檢測限（S/N＞3）結(jié)果見表3，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3，最低濃度的分離圖譜見圖5。

表3 方法線性及靈敏度

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精密度

采用7#濃度標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液連續(xù)進(jìn)樣6針考察精密度。結(jié)果如表4所示，6針樣品各峰的峰面積RSD%均小于0.31%，滿足方法要求，體現(xiàn)Vanquish Core液相色譜良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。見表4。

表4 樣品連續(xù)進(jìn)樣結(jié)果（n=6）

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回收率

取一定量的樣品，加入適量的標(biāo)準(zhǔn)液，按照2.5.2前處理后，分別測定維生素ADE的含量，計(jì)算出樣品與標(biāo)準(zhǔn)濃度扣除樣品濃度后的加標(biāo)回收率。見表5。

表5 回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

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樣品測試結(jié)果

采用上述方法對市售配方奶粉和特殊醫(yī)學(xué)配方食品樣品進(jìn)行測試，結(jié)果如表6顯示，樣品基質(zhì)對目標(biāo)維生素測試無干擾，表明方法適合不同食品中維生素A、D、E含量的測定。

表6 樣品測試結(jié)果

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結(jié)論

本文采用賽默飛Vanquish Core液相色譜，在前期數(shù)代二維液相色譜同時(shí)測定食品中維生素A、D、E方案基礎(chǔ)上，建立了一種皂化液直接稀釋上樣，測定維生素A、維生素D2、D3以及維生素E四種同分異構(gòu)體的方法。該方法采用全自動(dòng)在線SPE結(jié)合中心切割二維液相色譜取代傳統(tǒng)的液液萃取和進(jìn)一步純化，簡化了樣品的整個(gè)分析工作流程。方法學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本方法靈敏度、線性、重現(xiàn)性及準(zhǔn)確度均良好。實(shí)驗(yàn)簡化樣品前處理過程，縮短樣品分析周期，大幅提高了分析效率及降低實(shí)驗(yàn)成本。利用賽默飛獨(dú)特的雙三元液相，模塊搭建更緊湊，一套液相的臺面占地可以完成多套液相的測試工作，為企業(yè)節(jié)省了空間及時(shí)間成本。

參考文獻(xiàn)：

[1] 宋前流，陳群. 用藥護(hù)理. 北京. 人民軍醫(yī)出版社. 2014. 353-355頁

[2] AN_20071_HPLC. 在線固相萃取-二維液相色譜法分析配方奶粉中的維生素A、D和E異構(gòu)體含量.