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公敬欣 史俊霞

引

言

近年來生物制藥發(fā)展迅速，抗體藥物大多存在翻譯后修飾且種類復(fù)雜多樣，因此研發(fā)過程中的質(zhì)量控制顯得尤為重要，其中電荷異質(zhì)性是關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）之一，其可能影響生物制品的療效，甚至有可能帶來意想不到的副作用，從而影響藥品的安全性和有效性，所以在抗體藥物開發(fā)過程中選擇一種靈敏度高、特異性強(qiáng)的電荷異質(zhì)性檢測分析方法，是控制和穩(wěn)定抗體藥物生產(chǎn)質(zhì)量的有效手段。離子交換色譜技術(shù)廣泛用于生物制藥的開發(fā)以及抗體藥物電荷變異體的分離。賽默飛離子交換色譜柱，從ProPac WCX-10開始，不斷致力于為客戶帶來分析流程中的“金標(biāo)準(zhǔn)"。新產(chǎn)品ProPac 3R進(jìn)一步完善應(yīng)用方法，提供更優(yōu)的分離度結(jié)果，并采用單分散填料解決批次重現(xiàn)性問題。它采用生物惰性材料設(shè)計(jì)，可以為蛋白質(zhì)和AAV等分析提供可重復(fù)、高分辨率和耐用的強(qiáng)陽/陰離子交換色譜分離。

  產(chǎn)品特點(diǎn)：“3R"亮點(diǎn)   

Robustness：

高通量可輕松實(shí)現(xiàn)方法優(yōu)化，在不同的pH值、溫度、流動相組成下都具有優(yōu)異的性能，并完全兼容MS。

Reproducibility：

出色的柱間重現(xiàn)性消除了后期開發(fā)過程中酸性或堿性變異體檢測和鑒定的不確定性。

Resolution：

具有獨(dú)特的單分散聚合物材料和親水層，可顯著提高分辨率，為電荷異質(zhì)性分析提供一致的分離效果。

圖 3 μm單分散ProPac 3R粒子（左）與3 μm多分散粒子（右）的SEM圖像

案例分享1：雙抗酸堿變異體分離

本案例采用ProPac 3R SCX (4x100 mm,3 μm)色譜柱在鹽梯度下分離雙抗的酸堿變異體，圖1中該色譜柱有更好的分離結(jié)果，酸堿峰的分離度優(yōu)于ProPac WCX-10 (4x250 mm, 10 μm)和MAbPac SCX-10 (4x250 mm, 10 μm)柱子的結(jié)果。且由于采用3 μm粒徑，樣品在相同的低濃度進(jìn)樣條件下，ProPac 3R SCX的峰型更尖銳，酸堿峰分離效果更好，靈敏度更高。

圖1  ProPac 3R SCX色譜柱（黑色）、ProPac WCX-10（紫色）、MAbPac SCX-10（藍(lán)色）鹽梯度分離結(jié)果（點(diǎn)擊查看大圖）

案例分享2：三抗酸堿變異體分離

本案例采用ProPac 3R SCX (4x100 mm,3 μm)色譜柱在鹽梯度下分離三抗的酸堿變異體，如圖2所示該色譜柱有更好的分離結(jié)果，酸堿峰的分離度優(yōu)于MAbPac SCX-10 (4x250 mm, 10 μm) 和ProPac Elite WCX (4x150 mm, 5 μm)柱子的結(jié)果。

圖2  ProPac 3R SCX色譜柱（藍(lán)色）、MAbPac SCX-10（黑色）、ProPac Elite WCX（紫色）鹽梯度分離結(jié)果（點(diǎn)擊查看大圖）

在0.3 mL/min（圖3）和0.2 mL/min（圖4）的流速條件下，20分鐘 50分鐘鹽梯度對比，50分鐘梯度可以將難分離的堿性峰分得更好，流速對分離結(jié)果影響不大。并且由于ProPac 3R色譜柱采用單分散填料，降低流速并不會帶來很嚴(yán)重的擴(kuò)散效應(yīng)。

圖3  ProPac 3R SCX在0.3 mL/min的流速條件下，20 min鹽梯度（紫色）和50min（黑色） 鹽梯度的結(jié)果

（點(diǎn)擊查看大圖）

圖4  ProPac 3R SCX在0.2 mL/min的流速條件下，20 min鹽梯度（藍(lán)色）和50min（黑色） 鹽梯度的結(jié)果

（點(diǎn)擊查看大圖）

案例分享3：ADC酸堿變異體分離

本案例采用ProPac 3R SCX (4x100 mm,3 μm)色譜柱在CX-1 Buffer溶液pH梯度條件下分離ADC的酸堿變異體，如圖5所示該色譜柱有更好的分離結(jié)果，酸堿峰的分離度優(yōu)于MAbPac SCX-10 (4x250 mm, 10 μm) 和ProPac Elite WCX (4x150 mm, 5 μm)柱子的結(jié)果。

圖5  ProPac 3R SCX色譜柱（黑色）、MAbPac SCX-10（藍(lán)色）、ProPac Elite WCX（棕色）在CX-1 Buffer溶液pH梯度條件下分離結(jié)果（點(diǎn)擊查看大圖）

案例分享4：低等電點(diǎn)雙抗酸堿變異體分離

本案例采用ProPac 3R SAX (4x100 mm,3 μm)色譜柱在鹽梯度下分離低等電點(diǎn)雙抗的酸堿變異體，如圖6所示該色譜柱有更好的分離結(jié)果，酸堿峰的分離度優(yōu)于ProPac WAX-10 (4x250 mm, 10 μm) 和ProPac SAX-10 (4x250 mm, 10 μm)柱子的結(jié)果。

圖6 ProPac 3R SAX色譜柱（黑色）、ProPac WAX-10（藍(lán)色）、ProPac SAX-10（紫色）在鹽梯度條件下分離結(jié)果（點(diǎn)擊查看大圖）

案例分享5：AAV空實(shí)比分析

本案例采用ProPac 3R SAX (2x50 mm,3 μm)色譜柱在鹽梯度下分析AAV1，AAV6和AAV8的空實(shí)比（圖7）。

圖7  ProPac 3R SAX在鹽梯度下分析AAV1，AAV6和AAV8空實(shí)比色譜圖（點(diǎn)擊查看大圖）

結(jié)

論

ProPac 3R色譜柱在雙抗、三抗、ADC、重組蛋白和AAV空實(shí)比分析中均表現(xiàn)出*的分離性能和很高的靈敏度，且單分散的填料保證了批與批之間結(jié)果的穩(wěn)定性，方法耐用性的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步提升。ProPac 3R色譜柱獨(dú)特的單分散聚合物材料和親水層，使得該色譜柱可以采用質(zhì)譜兼容的緩沖體系，保證酸堿峰同樣具有良好的分離性能，完成在非變性質(zhì)譜條件下，對酸堿變異體來源的直接鑒定。

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