糖基化修飾是生命活動(dòng)中zui廣泛、zui重要的蛋白質(zhì)翻譯 后修飾之一，不僅影響著蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象、生物活 性、運(yùn)輸和定位，而且在分子識(shí)別、細(xì)胞通信、信號(hào)轉(zhuǎn) 導(dǎo)等特定生物過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。糖蛋白根 據(jù)其糖鏈結(jié)構(gòu)及糖基化位點(diǎn)主要有N-糖蛋白與O-糖蛋白 兩大類。據(jù)推斷，有超過50%的蛋白質(zhì)都發(fā)生了糖基化修 飾，但由于糖基化的高度復(fù)雜性，絕大多數(shù)糖蛋白尚未 被發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫中只有約10%的蛋白質(zhì)被注釋為糖蛋 白[1]。
糖鏈的組成與結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，糖鏈為非模板 合成且呈二維結(jié)構(gòu)，糖苷鍵連接位置和構(gòu)象的不同都會(huì) 形成差異的精細(xì)結(jié)構(gòu)。據(jù)報(bào)道，僅僅由6 個(gè)不同單糖組成 的寡糖鏈，其結(jié)構(gòu)就可能達(dá)到驚人的1012種[2]。其次，當(dāng)組 成與結(jié)構(gòu)各異的糖鏈連接在蛋白質(zhì)上形成糖蛋白時(shí)，又 構(gòu)成微觀不均一性，即糖基化位點(diǎn)上糖鏈結(jié)構(gòu)多樣化的 問題，一個(gè)蛋白可能存在多個(gè)糖基化位點(diǎn)，而每個(gè)位點(diǎn) 上又可能存在多種結(jié)構(gòu)的糖鏈[3]。 隨著以單抗為代表的糖蛋白藥物的開發(fā)，質(zhì)譜已廣泛應(yīng) 用于糖基化解析，通常先利用酶切或化學(xué)手段將糖鏈從 糖蛋白釋放，再分別進(jìn)行糖基化位點(diǎn)的鑒定和糖鏈結(jié)構(gòu) 的解析[4]。然而針對(duì)完整糖肽的解析，目前尚無成熟技 術(shù)。本文利用新一代組合型質(zhì)譜LTQ-Orbitrap Elite具有的 HCD/ETD“雙碎裂模式”，解析一種復(fù)雜糖蛋白的完整糖 肽，利用Byonic與SimGlycan軟件解析，成功發(fā)現(xiàn)2個(gè)N- 糖基化位點(diǎn)，16個(gè)O-糖基化位點(diǎn)，83種位點(diǎn)特異性糖鏈組 成與結(jié)構(gòu)信息，在未脫糖狀態(tài)下使蛋白序列覆蓋度高達(dá) 92.1%。
使用儀器：LTQ-Orbitrap Elite組合型高分辨質(zhì)譜儀
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