泛素蛋白連接酶E1抗體

1.特異性——免疫原

用于產(chǎn)生抗體的免疫原類型顯著影響抗體對(duì)靶蛋白的特異性。選擇針對(duì)不合適或質(zhì)量差的免疫原產(chǎn)生的抗體將導(dǎo)致不可靠且可能無(wú)法重現(xiàn)的結(jié)果。應(yīng)注意選擇針對(duì)已充分表征的免疫原產(chǎn)生的抗體。

2.肽

合成肽免疫原很少折疊成天然蛋白質(zhì)的類似三級(jí)結(jié)構(gòu)。此外，除非在合成過程中添加到肽中，否則它們不會(huì)表現(xiàn)出任何翻譯后修飾。因此，使用肽產(chǎn)生的抗體可用作蛋白質(zhì)印跡的有用試劑，因?yàn)橛捎跇悠诽幚磉^程中的變性和還原，靶蛋白具有線性化的表位。當(dāng)抗體需要區(qū)分具有高度保守氨基酸序列的兩種蛋白質(zhì)時(shí)，肽也可用作免疫原。在這些情況下，產(chǎn)生到差異區(qū)域的肽增加了制造差異抗體的可能性。

3.天然蛋白質(zhì)

如果將純化的蛋白質(zhì)用作免疫原，則針對(duì)它們產(chǎn)生的抗體可能無(wú)法識(shí)別蛋白質(zhì)印跡中變性蛋白質(zhì)的線性表位。一些使用天然蛋白質(zhì)產(chǎn)生的抗體只能識(shí)別蛋白質(zhì)表面的天然氧化構(gòu)象表位。對(duì)于單克隆抗體尤其如此。

The ubiquitin (Ub) pathway involves three sequential enzymatic steps that facilitate the conjugation of Ub and Ub-like molecules to specific protein substrates.

1、制備抗原。

2、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

3、動(dòng)物免疫。

4、試取血進(jìn)行測(cè)試，看看是否成功免疫。

5、如果成功免疫，殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采集全部血清。

6、純化出抗體。

7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。
一）抗原制備

Ig 是免疫球蛋白，對(duì)異種動(dòng)物而言，是良好的抗原物質(zhì)。可以刺激異種動(dòng)物產(chǎn)生抗 Ig 血清，

經(jīng)適當(dāng)提取后，產(chǎn)生抗 Ig 抗體，又叫第二抗體或抗抗體。在多數(shù)的間接標(biāo)記反應(yīng)中，均需制備

抗 Ig 抗體。

（二）材料與試劑

1．提取的動(dòng)物 Ig

2．弗氏佐劑和弗氏不佐劑

3．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔

4．其它材料及試劑

體外非細(xì)胞系統(tǒng)血紅素氧合酶-2（HEME OXYGENASE-2）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒

動(dòng)物糖蛋白刀豆蛋白A（ConA）樹脂法純化試劑盒

可溶性真菌/酵母細(xì)胞膜蛋白（粗提）制備試劑盒

EGFR 蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒

通用型副傷A（Salmonella Paratyphi A）定性基因檢測(cè)試劑盒

前列腺腫瘤CAG三聯(lián)子定量試劑盒

真菌/酵母鈣鎂ATP酶（Ca＋＋/Mg＋＋ －ATPase）活性比色法定量

純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧（ROS）魯米諾化學(xué)發(fā)光法

間接染色試劑盒

植物亮氨基肽酶（leucine aminopeptidase；LAP）

石蠟切片組織CDK6蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒

燕麥β-葡聚糖含量化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒

非同位素HRP化學(xué)發(fā)光法DNA南方雜交試劑盒

組織丙酮酸激酶（PK）總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

植物活性線粒體分離試劑盒

真核翻譯起始因子3H抗體

干擾素-gamma受體1抗體

熱休克蛋白-20抗體

KIAA1881蛋白抗體

P4501B1抗體

β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體

酪激酶A/B/C重組兔單克隆抗體

泛素蛋白連接酶E1抗體A型流感病毒PB1-F2抗體