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超敏 ECL 化學(xué)發(fā)光試劑盒

MCE 國(guó)際站：High Sensitivity ECL Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件：4°C，1 年避光保存

簡(jiǎn)介：超敏 ECL 化學(xué)發(fā)光試劑盒可用于檢測(cè)辣根過(guò)氧化物酶 (HRP) 標(biāo)記的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。

概述：MCE 超敏 ECL 化學(xué)發(fā)光試劑盒用于檢測(cè)辣根過(guò)氧化物酶 (HRP) 標(biāo)記的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。HRP 標(biāo)記的抗體直接或間接結(jié)合膜上的目的蛋白，在洗膜后加入本試劑盒配制的 ECL 工作液，即可由 HRP 催化產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，結(jié)果可通過(guò) X 光膠片壓片或 CCD 成像系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。本產(chǎn)品配方，靈敏度高，對(duì)抗原的低檢測(cè)限度可達(dá)低皮克級(jí)別，6-8 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)信號(hào)仍保持穩(wěn)定。本產(chǎn)品配方經(jīng)過(guò)優(yōu)化，適用于極低濃度的抗體檢測(cè)，在WB 實(shí)驗(yàn)中，一抗 (1 mg/mL) 儲(chǔ)存液可稀釋 1:1,000-1:50,000 倍 (終濃度約 0.2-1 μg/mL)，二抗 (1 mg/mL) 儲(chǔ)存液可稀釋 1:20,000-1:100,000 倍 (終濃度約10-50 ng/mL)。持久的發(fā)光信號(hào)，高的信噪比，保證了最佳的檢測(cè)效果。

描述：

MCE 高靈敏度 ECL 試劑盒通過(guò)在 HRP 和過(guò)氧化物存在下氧化魯米諾，實(shí)現(xiàn)低皮克級(jí)抗原檢測(cè)。該反應(yīng)產(chǎn)生長(zhǎng)時(shí)間的化學(xué)發(fā)光，可在 X 射線膠片或數(shù)字成像系統(tǒng)上可視化。

該試劑盒產(chǎn)生強(qiáng)而長(zhǎng)的信號(hào)（6-8 小時(shí)），結(jié)合非常低的背景水平，可實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間曝光并能夠檢測(cè)低豐度蛋白質(zhì)。在 Western Blot 實(shí)驗(yàn)中，一抗（1 mg/mL）的儲(chǔ)存液可以按 1:1,000-1:50,000 的比例稀釋。（最終濃度約為 0.2-1 μg/mL）。二抗（1 mg/mL）的儲(chǔ)存液可以按 1:20,000-1:100,000 的比例稀釋（最終濃度約為 10-50 ng/mL）。

操作說(shuō)明：1. 進(jìn)行常規(guī) WB 操作：電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、HRP 標(biāo)記抗體孵育、洗膜。一抗 (0.2-1 μg/mL) 室溫孵育 1 h 或 4°C 過(guò)夜，洗膜后，二抗 (10-50 ng/mL) 室溫孵育 30-60 min。2. 配制 ECL 工作液：在使用前等量混合適量 A 液和 B 液，混合后盡快使用。3. Western 二抗孵育后，進(jìn)行數(shù)次洗滌，用平頭鑷子將印跡膜取出，瀝干膜上的洗膜液，將結(jié)合有蛋白的一面朝上，放置于潔凈保鮮膜上。4. 根據(jù)印跡膜的大小，按 0.125 mL 工作液/cm2 膜的比例滴加 ECL 工作液到膜上，確保工作液均勻覆蓋在整張膜上，室溫孵育 3-5 min。5. 棄去印跡膜上的 ECL 工作液，用吸水紙吸去過(guò)多的液體。將印跡膜放在兩片保鮮膜中間，隨后進(jìn)行壓片檢測(cè)或成像儀檢測(cè)。6. 壓片檢測(cè)：將印跡膜固定于片夾內(nèi)。暗室內(nèi)壓片 1 min，立即顯影定影，根據(jù)結(jié)果再調(diào)整壓片時(shí)間?；蛑苯訅浩?0.5、1、3、5 min，然后一起顯影定影觀察結(jié)果。7. 成像儀檢測(cè)：將印跡膜放置到成像儀內(nèi)，參考儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：1. 為獲得最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)務(wù)必優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，包括：樣品量、凝膠類型、轉(zhuǎn)膜方法、膜類型、封閉試劑、洗滌緩沖液、一抗和二抗?jié)舛纫约胺跤龝r(shí)間等。2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)確保膜不會(huì)變干。3. 為獲得最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)?jiān)诜跤襟E中使用搖床。4. A 液和 B 液在吸取過(guò)程中必須更換槍頭，A 液和 B 液相互污染后會(huì)導(dǎo)致 A 液或 B 液逐漸失效，影響后續(xù)的使用效果。5. 實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)照明不會(huì)損害 ECL 工作液，但曝露于日光或強(qiáng)光下時(shí)間過(guò)久會(huì)降低試劑靈敏度，移至暗室操作即可。6. 疊氮鈉 (NaN3) 會(huì)抑制 HRP 活性，應(yīng)避免在緩沖液中使用 NaN3 。7. 接觸膜時(shí)請(qǐng)佩戴手套且使用干凈鑷子等潔凈器材，避免蛋白污染及高背景。8. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。9. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

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