ATP發(fā)光法細(xì)胞活力檢測試劑盒
MCE 國際站:Cell-ATP Viability Detection Kit
品牌:MedChemExpress (MCE)
存儲(chǔ)條件: -20°C,一年避光保存
簡介:MCE ATP 發(fā)光法細(xì)胞活力檢測試劑盒基于高靈敏度生物發(fā)光檢測技術(shù),通過對 ATP 進(jìn)行定量以測定培養(yǎng)物中活細(xì)胞數(shù)目及細(xì)胞活力。
概述:MCE ATP 發(fā)光法細(xì)胞活力檢測試劑盒基于高靈敏度生物發(fā)光檢測技術(shù),通過對 ATP 進(jìn)行定量以測定培養(yǎng)物中活細(xì)胞數(shù)目及細(xì)胞活力。ATP 是細(xì)胞新陳代謝的一個(gè)重要指標(biāo),其與活細(xì)胞數(shù)目呈良好的線性關(guān)系,是細(xì)胞活力檢測的重要標(biāo)志性分子。ATP 生物發(fā)光技術(shù)的原理為:熒光素酶以熒光素、三磷酸腺苷 (ATP) 和 O2 為底物,在 Mg2+ 存在時(shí),可將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能;在熒光素酶催化的發(fā)光反應(yīng)中,ATP 在一定的濃度范圍內(nèi),其濃度與發(fā)光強(qiáng)度呈線性關(guān)系,即在光信號與酶反應(yīng)體系中,發(fā)光值與 ATP 呈正比,ATP 與活細(xì)胞數(shù)成正比?;诖耍珹TP 法便可通過 ATP 含量來進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)或活力測定,且不受化合物自發(fā)熒光的影響。使用時(shí),只需將本試劑等體積添加至培養(yǎng)細(xì)胞中即可進(jìn)行檢測,均質(zhì)檢測方案避免了同類檢測產(chǎn)品使用時(shí)的細(xì)胞洗滌、培養(yǎng)基去除及多步加樣等操作,簡便快捷,減少操作誤差。與常用的 MTT、CCK8 法相比,ATP 法具有反應(yīng)更迅速、靈敏度更高、線性范圍更廣、信號更穩(wěn)定及便捷高效等優(yōu)點(diǎn)。本品與常用的細(xì)胞培養(yǎng)基兼容,如 RPMI1640、MEM、DMEM 和 Ham's F12,也不受酚紅和有機(jī)溶劑的影響,誤差小,準(zhǔn)確率高,且適用于自動(dòng)化高通量篩選,為細(xì)胞增殖與毒性分析提供了更加高效、便捷的解決方案。
描述:
ATP是細(xì)胞代謝的重要指標(biāo),與活細(xì)胞數(shù)量呈良好的線性關(guān)系。ATP生物發(fā)光技術(shù)原理為:熒光素酶以熒光素、三磷酸腺苷(ATP)和O2為底物,在Mg2+存在下將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能。在Luciflucase催化的發(fā)光反應(yīng)中,在一定濃度范圍內(nèi),ATP濃度與發(fā)光強(qiáng)度呈線性關(guān)系,ATP的量與細(xì)胞數(shù)量成正比。基于此,Cell-ATP活力檢測試劑盒可用于細(xì)胞計(jì)數(shù)或通過ATP含量測定活力。
MCE Cell-ATP活力檢測試劑盒是基于高靈敏度的ATP生物發(fā)光檢測技術(shù),用于檢測培養(yǎng)中的活細(xì)胞數(shù)量和活力。
操作說明:熒光素酶的活性對溫度較為敏感,故在實(shí)驗(yàn)開始前,應(yīng)先將本試劑與細(xì)胞平衡至室溫后再進(jìn)行測定。多次使用時(shí),建議將本產(chǎn)品適當(dāng)分裝凍存。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,選擇適用于化學(xué)發(fā)光檢測的孔板用于本實(shí)驗(yàn) (如適合細(xì)胞培養(yǎng)的白色或黑色多孔板),以下以 96 孔板舉例。1. 細(xì)胞準(zhǔn)備接種細(xì)胞:在 96 孔板中每孔接種 100 μL 細(xì)胞,確保每孔細(xì)胞數(shù)量在 5 × 104 以內(nèi)。設(shè)置不含細(xì)胞的培養(yǎng)液孔作為陰性對照,按照培養(yǎng)細(xì)胞的常規(guī)方法進(jìn)行培養(yǎng)。注:a) 接種細(xì)胞數(shù)目因檢測所用孔板不同存在差異,如用 384 孔板,每孔接種 25 μL 細(xì)胞,確保每孔細(xì)胞數(shù)量在 1 × 104 以內(nèi)。b) 可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案,如:加入藥物處理細(xì)胞,應(yīng)注意設(shè)置對照。若待測藥物的溶劑含量較高,熒光素酶反應(yīng)可能會(huì)被干擾,致化學(xué)發(fā)光信號受到影響,可設(shè)置含有溶劑的細(xì)胞培養(yǎng)液的對照孔以排除此干擾。c) 建議設(shè)置細(xì)胞濃度梯度,以確定 ATP 檢測的條件。2. 檢測試劑的準(zhǔn)備按照 96 孔板每孔 100 μL 的Cell-ATP Viability Detection Reagent 的量 (384 孔板每孔 25 μL 的 Cell-ATP Viability Detection Reagent 的量),即V細(xì)胞:VCell-ATP Reagent= 1:1),取適量本產(chǎn)品,解凍后平衡至室溫。3. 細(xì)胞活力檢測1) 取出細(xì)胞培養(yǎng)板,室溫平衡 10 min。注:室溫平衡通常不建議超過 30 min。2) 向 96 孔板的每孔加入 100 μL Cell-ATP Viability Detection Reagent (384 孔板每孔加入 25 μL Cell-ATP Viability Detection Reagent) 。3) 室溫振蕩混勻 2 min,以促進(jìn)細(xì)胞充分裂解。4) 室溫孵育 10 min,使發(fā)光信號趨于穩(wěn)定。5) 使用具有檢測化學(xué)發(fā)光功能的多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行化學(xué)發(fā)光測定,每個(gè)孔的檢測時(shí)間一般為 0.25-1 s。注:具體參數(shù)可根據(jù)儀器類型及檢測靈敏度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。6) 根據(jù)化學(xué)發(fā)光讀數(shù)直接計(jì)算細(xì)胞的相對活力,或根據(jù) ATP 標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出 ATP 的量以計(jì)算出細(xì)胞的相對活力。注:檢測效果可能會(huì)因細(xì)胞種類及生長狀態(tài)不同而有所差異,對于一些 ATP 含量特別高的細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞數(shù)量至 5 × 104 后可能不會(huì)再呈現(xiàn)明顯的線性關(guān)系,但化學(xué)發(fā)光讀數(shù)還是會(huì)繼續(xù)升高。
注意事項(xiàng):1. 本產(chǎn)品中含有熒光素酶,其活性對溫度較為敏感,反復(fù)凍融會(huì)致其逐漸失活,建議分裝凍存,避免反復(fù)凍融。2. 本產(chǎn)品避免室溫保存,如需多次使用,建議將試劑分裝后凍存,分裝所用耗材應(yīng)避免 ATP 污染。3. 反復(fù)凍融時(shí),可能會(huì)導(dǎo)致試劑中出現(xiàn)少量沉淀,可平衡至室溫后觀測沉淀溶解情況,如仍有殘留,可離心后去除。4. 若待測藥物的溶劑含量較高,熒光素酶反應(yīng)可能會(huì)被干擾,致化學(xué)發(fā)光信號受到影響,可設(shè)置含有溶劑的細(xì)胞培養(yǎng)液的對照孔以排除此干擾。5. 檢測時(shí)需使用適合于細(xì)胞培養(yǎng)的白色或黑色的多孔板 (96 孔板或 384 孔板),普通透明多孔板的相鄰孔之間可能會(huì)產(chǎn)生相互干擾。6. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作
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