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檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備要點(diǎn)：

1. 準(zhǔn)備各種實(shí)驗(yàn)儀器及材料（如：37℃恒溫箱，450nm酶標(biāo)儀、高速離心機(jī)、高精度加樣器及槍頭等等）

2. 按照生物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)條例，穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴乳膠手套做好防護(hù)工作

3. 使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)各試劑取出，平衡至室溫（至少30分鐘）

4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作方法進(jìn)行操作。說(shuō)明書以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。

樣品收集、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

在實(shí)際操作中，除了挑選優(yōu)良試劑外，有必要嚴(yán)厲依照操作過(guò)程進(jìn)行操作，一起做好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)控，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢查每一份標(biāo)本，才能確保檢查質(zhì)量。ELISA試劑盒如今國(guó)內(nèi)已有適當(dāng)數(shù)量的單位具有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這關(guān)于完成ELISA的規(guī)范化檢查起到了重要作用。小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中遇到的問(wèn)題上海軒澤康生物為您解答：

1. 問(wèn)：是否可以使用不同試劑盒的組分？

上海軒澤康生物解答：每一個(gè)試劑盒包含具有特定批號(hào)的組件，以確保所有組件單獨(dú)以及試劑盒中所有其他組件都能達(dá)到最佳性能。對(duì)這些特定批次進(jìn)行質(zhì)量控制測(cè)試。絕不建議用戶使用自己的組件或其他供應(yīng)商試劑盒。
2. 問(wèn)：我的標(biāo)準(zhǔn)曲線看起來(lái)很好，但我沒(méi)有在樣本中得到預(yù)期的信號(hào)，這是為什么？

上海軒澤康生物解答：樣品可能不含分析物。矩陣效應(yīng)可能掩蓋檢測(cè)。確保按照我司試劑盒中說(shuō)明書進(jìn)行稀釋。稀釋，前請(qǐng)檢查以確保稀釋操作正確。過(guò)度稀釋可能導(dǎo)致樣品低于標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍。

3. 問(wèn)：該如何洗板？

上海軒澤康生物解答：如果您使用的是自動(dòng)洗板機(jī)，我們建議定期檢查校正，并在清洗前用洗板機(jī)緩沖液沖洗系統(tǒng)。手動(dòng)洗板機(jī)也是如此?；蛘呤褂弥欣^器或洗滌瓶。用戶應(yīng)小心確保所有內(nèi)容物都被吸入，并在無(wú)棉紙上輕敲干燥。