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檢測原理：試劑盒采用一步間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被偽狂犬病毒抗原的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中豬偽狂犬病毒抗體的存在與否。

96T豬偽狂犬病毒抗體(PRV Ab)ELISA檢測試劑盒組成及其配置：

①微孔酶標板（ 12 孔×8 條）；

②陰性對照 0.5mL；

③陽性對照 0.5mL；

④檢測抗原-HRP 10mL；

⑤20×洗滌緩沖液 25mL；

⑥稀釋液 6mL；

⑦底物 A 6mL；

⑧底物 B 6mL；

⑨終止液 6mL；

⑩封板膜 2 張；說明書 1 份；自封袋 1 個.

操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加稀釋液40μL；

4.  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

樣品收集、處理及保存方法如下：豬偽狂犬病毒抗體(PRV Ab)ELISA檢測試劑盒

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

關(guān)于ELISA試劑盒操作常見的問題，上海軒澤康生物一一為您解答：

1. 一次ELISA實驗需要多長時間？

答：雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3。5-4小時，競爭ELIA法一次實驗需要2-2.5小時

2. 為什么有的試劑盒是采用競爭ELISA法？

答:小分子抗原或半抗原因為缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法。其原理是標本中的抗原和固相載體上的抗原競爭生物su化抗體上的結(jié)合位點，標本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的生物su化抗體愈少，*的顯色也愈淺。即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素等ELISA測定多用此法。

3. 試劑盒做的結(jié)果不理想怎么辦？

答：實驗結(jié)果不理想請及時與客服或技術(shù)支持取得聯(lián)系，我們可以幫助您一起分析實驗結(jié)果。如果僅憑實驗數(shù)據(jù)無法判斷，您可以將試劑盒發(fā)回我們進行售后檢測。