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植物硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NOT)ELISA檢測(cè)試劑盒樣品收集、處理及保存方法:
1. 樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因?yàn)榀B氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。
3. 植物萃取液或其它相關(guān)樣本:請(qǐng)1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè)。
(植物處理方案)
1、 新鮮植物組織請(qǐng)?jiān)谝旱谐浞盅心?,如無液氮,剪碎,玻璃勻漿器研磨也可;
2、 加入樣品體積9倍(鮮重:勻漿液體積)的提取液(0.1mmol PH7.4 PBS ), 4℃浸提2h;
3、 請(qǐng)于4℃ ,3000rpm,離心10min,收集上清;
4、 取上清檢測(cè)。
注:標(biāo)本均應(yīng)密封保存,短期內(nèi)使用(1周左右),可4度保存;若樣本收集與實(shí)驗(yàn)時(shí)間相隔較長,務(wù)必保存在-20或-80度,盡量不要超過半年,同時(shí)避免反復(fù)凍融。
植物硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NOT)ELISA檢測(cè)試劑盒組成及其配置:
1. 96孔酶聯(lián)板(Assay plate ):可檢測(cè)90個(gè)樣
2. 20x濃縮洗滌液(20X WashSolution): 25ml
3. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):0.3ml*6管
4. 稀釋液(Sample Diluent): 6ml
5. 終止液(Stop Solution): 6ml
6. 底物溶液A、B(Chromogen Solution):6ml*
7. 檢測(cè)抗體-HRP(HRP-Conjugate reagent):10ml
8.說明書(User manual)
9.封板膜(Closure plate membrane)
10.自封袋(Sealed bags)
ELISA試劑盒的使用過程中常見的問題有很多。如:加樣器不正 確、保溫設(shè)備不良、洗滌用水不規(guī)范等等對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響極大。我司為您準(zhǔn)備了以下解決問題的方法:
1)嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃,使用后立即冷藏保存試劑。
2)洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,溫育過程中不要讓微孔干燥。
3)消除底板殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4)底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5)避免試劑盒標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
6)任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體,避免影響試劑中的生物活性。
7)平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
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