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科研人卵巢癌抗原(CA125)ELISA檢測(cè)試劑盒在國(guó)內(nèi)眾多實(shí)驗(yàn)室被廣泛使用，深受廣大科研者的好評(píng)。上海軒澤康生物專ye供應(yīng)酶聯(lián)免疫分析試劑盒，部分現(xiàn)貨供應(yīng)產(chǎn)品有人、大鼠、小鼠、兔、豬、犬、雞、猴、植物等ELISA試劑盒。所有elisa試劑盒均提供免費(fèi)代測(cè)，實(shí)驗(yàn)全程提供技術(shù)指導(dǎo)。歡迎新老客戶咨詢、訂購(gòu)！

一.   檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人卵巢癌抗原（CA125）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人卵巢癌抗原（CA125）的存在與否。

二. 96T試劑盒組成及其配置：

①微孔酶標(biāo)板（ 12 孔×8 條）；

②陰性對(duì)照 0.5mL；

③陽(yáng)性對(duì)照 0.5mL；

④檢測(cè)抗原-HRP 10mL；

⑤20×洗滌緩沖液 25mL；

⑥稀釋液 6mL；

⑦底物 A 6mL；

⑧底物 B 6mL；

⑨終止液 6mL；

⑩封板膜 2 張；說(shuō)明書(shū) 1 份；自封袋 1 個(gè).

備注：20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

三.科研人卵巢癌抗原(CA125)ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟:

①?gòu)氖覝仄胶?20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

②設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各 50μL；

③待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加稀釋液 40μL；

④隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

⑤棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

⑥每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

⑦每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值。

四. 產(chǎn)品展示：

五. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷：

①試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔 OD 值平均值≥1.00； 陰性對(duì)照孔 OD 值平均值≤0.15。

② 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

③陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

④陽(yáng)性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽(yáng)性

六. 常見(jiàn)問(wèn)題解答：

1.   問(wèn)：如何選擇合適的陽(yáng)性對(duì)照？

上海軒澤物解答：陽(yáng)性對(duì)照的基本組成應(yīng)該盡量與檢測(cè)樣本的組成一致，一般陽(yáng)性對(duì)照多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì)，加入一定量的待檢物質(zhì)。比如：以人血清為標(biāo)本的測(cè)定，陽(yáng)性對(duì)照多用確定的病人血清或者以覆蓋人血漿為原料加入一定量標(biāo)準(zhǔn)品。

2. 問(wèn)：我能否在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前*收集樣品？

上海軒澤物解答：可以。如若收集的樣本不能及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，請(qǐng)保存至-20℃或按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行保存。應(yīng)避免反復(fù)凍融。