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植物(COX)ELISA試劑盒檢測(cè)前準(zhǔn)備工作:
1. 請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象;放置室溫,輕搖均勻,待結(jié)晶溶解后再配置洗滌液??蓪?0ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液,未用完的放回4℃
3. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
植物(COX)ELISA試劑盒使用指南:
步驟一:從冷藏環(huán)境中取出試劑盒,室溫放置30分鐘以確保所有試劑穩(wěn)定。
步驟二:根據(jù)待測(cè)樣本數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條密封放回冰箱。
步驟三:分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔、待測(cè)樣品孔(為避免實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔)。
步驟四:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白孔中,空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水。齊譽(yù)孔加入50ul的待測(cè)樣本。
步驟五:標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔各孔加入100ul的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。
步驟六:酶標(biāo)板用封板膜密封后放入濕盒于37℃恒溫孵育1小時(shí)。
步驟七:洗板。用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15~30秒,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙拍干
步驟八:各孔分別加入底物A、底物B 50ul(不用吹打)
步驟九:37℃避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液
步驟十:在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值
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