【葡萄糖-6-磷酸酶簡介】：主要存在于肝臟、腎 臟、 小腸粘膜細(xì)胞、胰島細(xì)胞中，催化 6-磷酸葡萄糖水解為葡萄糖的關(guān)鍵酶，該反應(yīng)是糖原分 解和糖異生的最后一步反應(yīng)。在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。

檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被葡萄糖-6-磷酸酶（G6PC）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的葡萄糖-6-磷酸酶（G6PC）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品活性。

大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G6PC)ELISA檢測試劑盒組成：（檢測范圍請參考說明書）

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實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備要點(diǎn)：

1.     準(zhǔn)備各種實(shí)驗(yàn)儀器及材料（如：37℃恒溫箱，450nm酶標(biāo)儀、高速離心機(jī)、高精度加樣器及槍頭等等）

2.     按照生物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)條例，穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴乳膠手套做好防護(hù)工作

3.     使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)各試劑取出，平衡至室溫（至少30分鐘）

4.     嚴(yán)格按照說明書的操作方法進(jìn)行操作。說明書以英文說明書為準(zhǔn)。

實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材：

1.      酶標(biāo)儀（450nm）

2.      高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.      37℃恒溫箱

4.      蒸餾水或去離子水

大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G6PC)ELISA檢測試劑盒注意事項(xiàng)：

1.  實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

2.  加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免第一孔與最后一孔間的時(shí)間間隔過大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。

3.  孵育：嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。 

4.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

5.  建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。 

6.  建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商聯(lián)系，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

 安全性 ：

1． 避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

為了幫助您更好的解決在實(shí)驗(yàn)中可能碰到的各種問題，上海軒澤康生物設(shè)計(jì)了這些問題指導(dǎo)，配以試劑盒內(nèi)的說明書一起供您參考使用：

1.     問：ELISA試劑盒是否可以分批使用？

上海軒澤康生物解析：可以分批使用，試劑盒內(nèi)酶標(biāo)板都是可拆卸的。

2.     問：ELISA實(shí)驗(yàn)整個(gè)過程需要多久？

上海軒澤康生物解析：從實(shí)驗(yàn)方法來看，雙抗體夾心法實(shí)驗(yàn)需要約3.5~4小時(shí)，競爭法實(shí)驗(yàn)需要2-2.5小時(shí)。這個(gè)時(shí)間是單純的上機(jī)時(shí)間，不包括樣本采集時(shí)間和樣本處理時(shí)間。

3.     問：說明書上的檢測限不適用怎么辦？

上海軒澤康生物解析：我們的試劑盒檢測限都是根據(jù)常規(guī)樣本定標(biāo)，如遇低于檢測限的特殊樣本可以聯(lián)系我司客服咨詢定制檢測限。

4.     問：為什么建議樣本和標(biāo)曲做復(fù)孔？

上海軒澤康生物解析：①求平均值，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。②防止跳孔。③對自己的操作進(jìn)行評估。④對試劑盒性能進(jìn)行評估。

5.     問：樣本反復(fù)凍融對ELISA測試結(jié)果有影響嗎？

上海軒澤康生物解析：盡量避免反復(fù)凍融，收集處理完樣本后分裝冷凍。多次凍融易引起蛋白降解，測試出值水平下降，相對趨勢減小。