小鼠胰腺衍生因子(FAM3A)ELISA檢測試劑盒樣品收集、處理方法：

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

關(guān)于血清樣本注意事項(xiàng)：

大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP未標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異顯色。此外還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。

血清的采集、處理以及保存如下:

①    真空采集新鮮血液，加入無菌試管中；

②    采血后室溫靜置1小時；

③    將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心10分鐘

④    取上清，分裝凍存?zhèn)溆茫?4小時內(nèi)檢測存于2-8℃；1個月內(nèi)檢測存于-20℃；長期檢測可存于-80℃，可放置保存6個月）

樣本應(yīng)避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被胰腺衍生因子（FAM3A）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰腺衍生因子（FAM3A）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

小鼠胰腺衍生因子(FAM3A)ELISA檢測試劑盒組成及其配置：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、40、80、160、320、640 pg/mL