上海軒澤康生物有限公司為您提供科研elisa試劑盒，種屬標(biāo)本齊全，有zhuan門針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒；另有針對(duì)各種動(dòng)物（鼠、兔、山羊、牛、豬、犬、雞、馬、猴、魚）、植物土壤以及藥殘類酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒。

樣品收集、處理方法：小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

關(guān)于血清樣本注意事項(xiàng)：

大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP未標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異顯色。此外還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。

血清的采集、處理以及保存如下:

①    真空采集新鮮血液，加入無菌試管中；

②    采血后室溫靜置1小時(shí)；

③    將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心10分鐘

④    取上清，分裝凍存?zhèn)溆茫?4小時(shí)內(nèi)檢測(cè)存于2-8℃；1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)存于-20℃；長(zhǎng)期檢測(cè)可存于-80℃，可放置保存6個(gè)月）

樣本應(yīng)避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測(cè)原理：小鼠Elisa試劑盒的檢測(cè)原理主要是根據(jù)抗原或者抗體的固定化以及抗原或者抗體酶標(biāo)記作用，再加入酶底物后，使其發(fā)生顯著的顏色反應(yīng)。再根據(jù)顏色反應(yīng)來對(duì)有效成分進(jìn)行定量定性分析。針對(duì)于結(jié)合物的保存，酶和抗體都是活性物質(zhì)，容易完成失活現(xiàn)象，應(yīng)該變成高濃度并在冰箱中保存一年方可更穩(wěn)定一些。

小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。