樣品收集、處理及保存方法：斑馬魚雌激素(E)ELISA檢測(cè)試劑盒 課題研究

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測(cè)原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被雌激素（E）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌激素（E）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

斑馬魚雌激素(E)ELISA檢測(cè)試劑盒 課題研究試劑盒組成:

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、5、10、20、40、80 pg/mL

關(guān)于ELISA試劑盒操作常見的問(wèn)題，上海軒澤康生物一一為您解答：

1. 一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要多長(zhǎng)時(shí)間？

答：雙抗體夾心ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要3。5-4小時(shí)，競(jìng)爭(zhēng)ELIA法一次實(shí)驗(yàn)需要2-2.5小時(shí)

2. 為什么有的試劑盒是采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法？

答:小分子抗原或半抗原因?yàn)槿狈勺鲓A心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法。其原理是標(biāo)本中的抗原和固相載體上的抗原競(jìng)爭(zhēng)生物su化抗體上的結(jié)合位點(diǎn)，標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的生物su化抗體愈少，*的顯色也愈淺。即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素等ELISA測(cè)定多用此法。

3. 試劑盒做的結(jié)果不理想怎么辦？

答：實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想請(qǐng)及時(shí)與客服或技術(shù)支持取得聯(lián)系，我們可以幫助您一起分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果僅憑實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)無(wú)法判斷，您可以將試劑盒發(fā)回我們進(jìn)行售后檢測(cè)。