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樣品收集、處理及保存方法：

1.  樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2.  標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。

3.  植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請(qǐng)1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。

4.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品：

1.      酶標(biāo)儀（450nm）

2.      高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.      37℃恒溫箱

植物黃烷酮3-羥化酶(F3H)ELISA檢測(cè)試劑盒使用注意事項(xiàng)：1. 本試劑盒取出的試劑在室溫條件下使用，溶液應(yīng)輕輕搖勻后使用。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，加熱使結(jié)晶溶解后再配制。2. 底物液使用前建議先行檢查，若溶液顏色發(fā)藍(lán)則已失效，棄去。3. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待查樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。4. 板條開(kāi)封后剩余板條要密封好，保持板條干燥。5. 不同批號(hào)的試劑盒組分不能混用。6.正確拿酶標(biāo)板：不要接觸板的底部，否則會(huì)影響度數(shù)。

植物黃烷酮3-羥化酶(F3H)ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟：

【標(biāo)準(zhǔn)品的加樣】：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。
【加樣】：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
【加酶】：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。
【溫育】：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
【配液】：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
【洗滌】：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
【顯色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
【終止】：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
【測(cè)定】：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。