目錄:優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司>>科研細(xì)胞>>細(xì)胞系>> 復(fù)蘇/凍存LMH 雞肝癌細(xì)胞
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更新時(shí)間:2024-07-13 17:41:48瀏覽次數(shù):910評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
---|---|---|---|
貨號(hào) | YLK-XB1737h | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | LMH |
LMH 雞肝癌細(xì)胞
細(xì)胞特性:
1) 來(lái)源:雞肝
2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)
3) 含量:>1x106 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途:僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存:
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的注意事項(xiàng):
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完培6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完培來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備Waymouth MB 752/1 培養(yǎng)基;特級(jí)胎牛血清,10%;雙抗1%。
注意:
1 細(xì)胞貼壁性差,該細(xì)胞生長(zhǎng)需要用到0.1% 的明膠包被的培養(yǎng)瓶或使用Corning的cellbind細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ,補(bǔ)液的時(shí)候不要沖刷到細(xì)胞層,2-3天換液,90%以上匯合度傳代。
2 除去培養(yǎng)基,用冷的0.25%胰蛋白/酶、0.03%EDTA溶液沖洗兩次。讓燒瓶在室溫下靜置 (或在 37℃下孵育) 直至細(xì)胞分離。
3 加入新鮮培養(yǎng)基,吸出,然后分配到新的培養(yǎng)瓶中。
燒瓶必須涂有 0.1% 明膠。要準(zhǔn)備容器,請(qǐng)用明膠溶液淹沒(méi)它們,冷藏 5 到 10 分鐘,然后取出液體。以這種方式制備的容器可以立即使用。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
細(xì)胞處理:
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完培重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
LMH 雞肝癌細(xì)胞
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