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酶聯(lián)科興生物人糖基化依賴的細胞黏附分子GlyCAM-1試劑盒 |
*,質量保證。 |
天津酶聯(lián)科興生物長期專業(yè)供應ELISA試劑盒,產品種類齊全,包括人、大小鼠、牛羊馬猴等各種種屬的ELISA試劑盒。本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中待測物質水平 |
注:本公司提供試劑盒免費代測服務。需要其他檢測試劑盒請咨詢銷售人員。 |
產品名稱 酶聯(lián)科興人糖基化依賴的細胞黏附分子GlyCAM-1試劑盒 |
產品規(guī)格 96T/48T |
保存 2-8°C |
有效期 6個月 |
產品說明書 咨詢銷售人員獲取說明書 |
實驗原理: |
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中兔層粘連蛋白(LN)水平。用純化的兔層粘連蛋白(LN)捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入兔層粘連蛋白(LN),再與HRP標記的檢測抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的兔層粘連蛋白(LN)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中兔層粘連蛋白(LN)含量。 |
樣品采集: |
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。 2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。 3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。 四、兔骨形成蛋白(BMPs)(NF-κBp65)ELISA試劑盒檢驗方法 1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。 2.取所需用量酶標板條,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。 3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。 4.混勻,置37℃反應30分鐘。 5.扣去孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。 6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應30分鐘。 7.洗滌,同步驟5。 8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應10分鐘。 9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調零,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值) |
自備物品: |
1 、 37 ℃ 恒溫箱 |
2 、 標準規(guī)格酶標儀 |
3 、 精密移液器及一次性吸頭 |
4 、 蒸餾水 |
5 、 一次性試管 |
6 、 吸水紙 |
樣本處理及要求: |
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。 |
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。 |
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 |
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。 |
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。 |
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融. |
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 |
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